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左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞的保护作用

作　者: 尹晓琳
导　师: 孔庆兰
学　校: 青岛大学
专　业: 眼科学
关键词: 细胞培养左卡尼汀糖尿病视网膜病变氧化应激
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的原代培养新生大鼠视网膜神经细胞,建立高糖模型后,探讨左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞保护作用。方法取出生后1-3d SD)大鼠视网膜,0.25%胰蛋白酶消化制成不同大小细胞团的悬液,接种于包有多聚赖氨酸的培养瓶中培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,取义7-9天细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光鉴定。取8-10天的细胞进行试验,实验设计为5组：正常细胞培养组(对照组)、高糖模型组、高糖模型组+左卡尼汀(50μmol/L)、高糖模型组+左卡尼汀(100μmol/L)、高糖模型组+左卡尼汀(200μmol/L),用MTT法检测细胞OD值来反映视网膜神经细胞活性,以电子自旋共振法(ESR)检测各组一氧化氮(N0)及活性氧(ROS)的释放来反映氧化应激程度。结果免疫荧光显示,培养的细胞大部分抗神经元特异性烯醇化酶抗体反应阳性。MTT结果显示高糖模型细胞活性显著降低(P＜0.05),左卡尼汀浓度200μmol/L,作用时间48h时对视网膜的保护作用最好。浓度200μmol/L时,对神经细胞产生毒性作用。ESR检测结果示高糖使细胞生成NO、ROS增多(p＜0.01),左卡尼汀能明显抑制NO、ROS的生成。结论高糖条件下视网膜神经细胞NO、ROS生成增多；左卡尼汀能抑制高糖条件下视网膜神经细胞氧化应激反应。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-6
引言  6-8
第1章实验方法  8-11
  1.1 细胞培养及模型制备  8
    1.1.1 常用试剂及仪器  8
    1.1.2 细胞培养步骤及高糖模型制备  8
  1.2 免疫荧光鉴定  8-9
    1.2.1 常用试剂及仪器  8-9
    1.2.2 实验步骤  9
  1.3 MTT法测细胞活性  9-10
    1.3.1 常用试剂及仪器  9
    1.3.2 常用液体配置  9
    1.3.3 实验步骤  9-10
  1.4 电子自旋共振(ESR)检测NO、氧自由基释放量  10-11
    1.4.1 常用液体配置  10
    1.4.2 常用液体配置  10
    1.4.3 实验步骤  10-11
第2章实验结果  11-14
  2.1 视网膜神经细胞原代培养及鉴定  11
  2.2 左卡尼汀对高糖模型细胞活性各组MTT结果  11
  2.3 各组NO、氧自由基释放量结果  11-14
第3章讨论  14-21
  3.1 视网膜神经细胞原代培养及签定  14-15
  3.2 ROS与细胞凋亡  15-18
  3.3 左卡尼汀与线粒体释放NO与ROS  18-21
结论  21-22
参考文献  22-30
附图  30-32
综述  32-46
  参考文献  40-46
攻读学位期间的研究成果  46-47
附录  47-48
致谢  48-49

左卡尼汀对高糖条件下视网膜神经细胞的保护作用

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