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高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究

作　者: 王超
导　师: 李昭宇
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 外科学
关键词: 高迁移率族蛋白B1 肝细胞癌小干扰RNA 侵袭迁移
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。关于HMGB1与肝细胞癌关系的研究也已开展。有研究表明HMGB1在胃癌、食管癌、胰腺癌、结肠癌中表达增高，但具体作用机制尚不明确。本实验研究，我们通过检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织中HMGB1的表达情况，并使用RNA干扰技术合成针对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的siRNA，观察其对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响，并对其意义及机制进行探讨分析。方法（1）收集取病理证实的肝细胞癌组织标本10例，另选取经病理证实为肝细胞癌癌旁的正常肝组织10例作为对照。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）检测肝癌与癌旁组织、人肝癌细胞株HepG2与正常肝细胞株L-02中HMGB1表达的差异；（2）RNA干扰技术合成3对特异性针对HMGB1的HMGB1-siRNA并转染HepG2，设置空白组与对照组，并使用Western bllot技术检测沉默效果；（3）选择沉默效果最好的HMGB1-siRNA，应用跨膜迁移实验、平面迁移实验检测细胞侵袭迁移能力的变化；（4）通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）方法进一步分别测定HMGB1-siRNA转染进入HepG2后的MMP2、MMP9、ICAM1和TIMP2的mRNA和蛋白表达水平。结果实验结果表明肝癌组织较癌旁组织HMGB1表达水平明显增加，肝癌细胞株HepG2较正常肝细胞株L-02中HMGB1也明显增高（均P<0.05）；HMGB1-siRNA转染后可明显降低HepG2中HMGB1的表达，其中HMGB1-siRNA-1的沉默效率最高（P<0.05），用40nM的HMGB1-siRNA-1对HMGB1的抑制效率在24、48、72h均达80%以上，96h后明显下降（均P<0.05）；用40nM的HMGB1-siRNA-1转染HepG2，24h后HepG2细胞迁移和侵袭能力下降（均P<0.05）。转染后MMP2、MMP9、ICAM1的mRNA表达明显下调，而TIMP2的mRAN表达明显上调（均P<0.05）。结论HMGB1在肝癌中高表达，可促进肝癌细胞的侵袭迁移，通过HMGB1-siRNA抑制肝癌细胞中HMGB1表达可明显降低肿瘤细胞侵袭迁移能力。HMGB1表达抑制后，MMP2、MMP9、ICAM1表达下调，TIMP2表达上调，说明HMGB1对肝癌细胞的侵袭迁移能力与MMP2、MMP9、ICAM1和TIMP2的表达有关。这可能是肝癌治疗潜在的靶基因。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
符号说明  9-12
前言  12-15
第一章 HMGB1 在肝癌中的表达及临床意义  15-31
  摘要  15-16
  材料与方法  16-23
  实验结果  23-29
  讨论  29
  结论  29-31
第二章 HMGB1 的小干扰 RNA 合成对人肝癌细胞侵袭迁移能力的影响  31-45
  摘要  31-32
  材料与方法  32-37
  实验结果  37-43
  讨论  43-44
  结论  44-45
第三章 HMGB1 的小干扰 RNA 合成对人肝癌细胞肿瘤相关因子的影响  45-56
  摘要  45-46
  材料与方法  46-51
  实验结果  51-54
  讨论  54-55
  结论  55-56
参考文献  56-59
文献综述  59-70
  参考文献  65-70
致谢  70-71
攻读学位期间发表的学术论文  71

高迁移率族蛋白B1对肝癌细胞侵袭能力的影响及机制的初步研究

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