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替比夫定对HepG2肿瘤干细胞标记分子CD133、AFP的影响及其生物学意义的研究
作 者: 王立巍
导 师: 艾迎春; 袁禧先; 卓越; 鲍秀琦
学 校: 佳木斯大学
专 业: 内科学
关键词: 肝癌 肿瘤干细胞 甲胎蛋白 核苷类药物
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
下 载: 23次
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内容摘要
目的:探讨替比夫定对肝癌细胞株HepG2细胞肿瘤干细胞标志分子CD133和甲胎蛋白(AFP)的影响,以发现核苷类药物治疗肝癌患者的分子生物学机制,为肝癌的综合治疗提供新的实验数据和理论根据。方法:本研究以HepG2细胞为实验细胞,实验分为两组:实验组(替比夫定组)和对照组。细胞培养至细胞80%铺满培养瓶时,实验组给予含替比夫定(10umol/L)的细胞培养液培养,对照组仅给予细胞培养液培养。隔天更换细胞培养液。继续培养细胞9天,收集细胞。1)1×107细胞/ml被用于流式细胞仪双染法检测HepG2细胞表面CD133的表达:2)1×107细胞/ml被用于化学发光免疫检测细胞内AFP含量;3)1×107细胞/ml被用于实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测细胞内CD133和AFP的表达。结果:1.流式细胞仪检测显示,替比夫定组和对照组的CD133阳性细胞的表达率分别为1.9%±0.04和0.83%±0.02,经统计学卡方检验,两组间存在显著性差异(P<0.05),提示替比夫定处理使HepG2细胞表面肿瘤干细胞标志分子CD133表达减少。2. Real-time PCR检测,替比夫定组和对照组HepG2细胞CD133mRNA的表达分别为0.609士0.057、0.956士0.132,经统计学t检验,两组间存在明显差别(P<0.05)。3.两组细胞在6孔培养板上培养3天后,取细胞裂解液,采用化学发光免疫分析法,测得两组细胞内AFP的数值分别为:180.32士3.92、149.07士3.57,t检验显示,两组间HepG2细胞内AFP的表达差异显著,有统计学意义,P<0.05。4.两组细胞培养9天后,同样细胞数的细胞获取总RNA,分别取20ng/ul RNA用于Real-time PCR检测,替比夫定组和对照组AFP表达分别为1.061士0.034、2.507士1.379,t检验显示,两组间有统计学意义的差异,P<0.05。结论:替比夫定干预HepG2细胞能抑制细胞肿瘤干细胞标志分子CD133的表达,降低AFP合成,这可能是应用核苷类药物治疗肝炎,延缓肝癌发生的分子生物学机制之一。
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全文目录
摘要 5-7 Abstract 7-9 前言 9-11 文献综述 11-20 材料与方法 20-26 结果 26-31 讨论 31-35 结论 35-36 参考文献 36-43 致谢 43-44 英文缩写 44-45 攻读学位期间发表的论文 45
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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