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钙敏感受体基因启动子区在食管鳞癌中频繁甲基化的初步研究

作　者: 景坤玉
导　师: 薛乐勋
学　校: 郑州大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 食管鳞癌 DNA甲基化 钙敏感受体 CASR 甲基化特异性PCR
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


背景食管癌是世界范围内常见的消化道肿瘤之一。我国食管癌发病率呈逐年上升趋势,恶性程度高,预后差,严重威胁人类健康。食管癌早期症状不典型,多数病人就诊时已错过最佳治疗期。因此,筛选针对食管癌的早期诊断标志物是改善病人生存质量与预后的关键。钙敏感受体(calcium-sensing receptor, CASR)基因定位于染色体3q13,是G蛋白耦联受体超家族成员,在维持机体钙离子及其他金属离子稳态中起重要作用。新近发现,CASR基因启动子区在结直肠癌中作为潜在的抑癌基因异常高甲基化,但在食管癌中未见类似报道。目的本课题首先从表观遗传学角度研究CASR基因启动子区在食管癌中的甲基化状况,然后在转录和蛋白水平研究CASR基因的表达是否受到了启动子区甲基化的调控,并分析了其在食管鳞癌组织与正常食管黏膜中的甲基化状况,探讨其与食管鳞癌发生的关系,为食管癌的早期诊断及防治提供理论依据。方法采用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR, MSP)、硫化测序(Bisulfite sequencing, BSSQ)方法分析6株食管癌细胞系中CASR基因启动子区的甲基化状态及频率。采用半定量逆转录PCR(Semi-quantitative reverse transcriptase PCR, RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western Blot)方法分析甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷(5-aza-2’-deoxycytidine)处理前后食管癌细胞系中CASR基因转录水平和蛋白水平的表达情况,探讨其表达是否受甲基化调控。同时采用MSP方法检测了68例原发食管鳞癌标本以及8例正常食管黏膜中CASR基因启动子区的甲基化状态,结合相关临床病理资料,运用统计学分析软件SPSS13.0对相关数据进行X2检验,探讨其与食管癌发生发展之间的关系。结果1. CASR基因在食管癌细胞系中的甲基化状态及频率：所检测的6株食管癌细胞系中,KYSE30, KYSE140及BIC1中CASR启动子区发生完全甲基化,甲基化频率分别为：92.7%、93.6%、87.3%；KYSE70、TE8为部分甲基化,而KYSE510为非甲基化。2.去甲基化药物5-Aza-dc处理前后CASR基因在食管鳞癌细胞系中的表达状况：所检测的发生甲基化的食管鳞癌细胞系KYSE30、KYSE140、TE8中,处理前CASR基因表达缺失或下调,处理96h后其表达显著恢复；而在未发生甲基化的细胞系KYSE510中,处理前后其表达水平均无明显差异。3. CASR基因在食管鳞癌组织中的甲基化状态及其与临床病理特征之间的关系：在68例原发食管鳞癌组织中,CASR基因启动子区有48例存在甲基化,甲基化率为71%(48／68),而正常食管黏膜中CASR基因均未检测到甲基化发生(0/8)。CASR基因启动子区甲基化状态与食管鳞癌患者的年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤TNM分期及淋巴结转移等方面比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1. CASR基因在食管鳞癌细胞系中的表达受到启动子区甲基化的调控,CASR的表观遗传异常沉默可能在原发食管鳞癌发生发展中起重要作用。2. CASR基因启动子区在食管癌细胞系与原发食管鳞癌中频繁发生甲基化,表明CASR启动子区甲基化状态可能作为原发食管鳞癌早期诊断与筛查的潜在标志物和治疗靶点；

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-11
中英文缩略词对照表  11-12
前言  12-15
第一部分 CASR基因在食管癌细胞系中的甲基化检测  15-28
  1.1 实验材料  15-18
  1.2 实验方法  18-24
  1.3 结果  24-26
  1.4 讨论  26-27
  1.5 小结  27-28
第二部分 去甲基化处理对CASR基因在食管鳞癌细胞系中表达的影响  28-38
  2.1 实验材料  28-31
  2.2 实验方法  31-35
  2.3 结果  35-36
  2.4 讨论  36-37
  2.5 小结  37-38
第三部分 CASR基因在人食管鳞癌组织中的甲基化改变  38-47
  3.1 实验材料  38-40
  3.2 实验方法  40-43
  3.3 结果  43-45
  3.4 讨论  45-46
  3.5 小结  46-47
结论  47-48
参考文献  48-51
钙敏感受体基因在肿瘤中的研究进展  51-65
  参考文献  58-65
致谢  65-66
个人简历及在校期间发表文章  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 食管肿瘤
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