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JNK选择性抑制剂对雌激素诱导的ICP孕鼠肝细胞Bsep、Ntcp表达的影响

作　者: 陈秋玲
导　师: 吴新华
学　校: 中南大学
专　业: 妇产科学
关键词: 妊娠期肝内胆汁淤积症 c-Jun氨基末端激酶 sp600125 胆盐输出泵(Bsep) 胆酸共转运蛋白(Ntcp)
分类号: R714.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：利用乙炔雌二醇(EE)诱导大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症模型(Intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP),观察孕鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆汁酸浓度的变化情况,检测孕鼠肝组织内c-Jun、 Bsep(肝细胞胆盐输出泵)和Ntcp(胆酸共转运蛋白)的表达,并初步探讨JNK选择性抑制剂SP600125在雌激素诱导ICP孕鼠中的可能作用机制。方法：选择SPF级Sprague-Dawley (SD)孕鼠40只,按随机数字表法随机分为5组,每组8只。在妊娠的第15至19天分别予以一下处理：A组为正常对照组：每天一次颈部皮下注射1,2,丙二醇(propylene glycol, PG)2.5mL·kg-1·d-1;B组为ICP模型组：每天一次颈部皮下注射浓度为0.1%的含17—β—乙炔雌二醇(EE)的丙二醇溶液2.5mg·kg-1·d-1;C组DMSO溶剂对照组：在予以乙炔雌二醇前的2小时,予以腹腔注射单纯的JNK抑制剂SP600125的溶剂DMSO;D、E两组为sp600125干预组：在予以乙炔雌二醇前的2小时,予以腹腔注射JNK抑制剂SP600125腹腔内注射(剂量分别5mg·kg-1· d-1,10mg·kg-1·d-1)。造模及干预5天后用水合氯醛麻醉大鼠,立刻门静脉取血检测血清总胆汁酸(total bile acid, TBA)、血清谷丙转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartateaminotrans-ferase, AST)。光镜观察孕鼠肝脏组织病理学变化,用免疫组化法检测各组孕鼠肝脏组织c-Jun的表达水平,并用Western blot检测ICP相关蛋白Bsep、Ntcp的表达水平。结果：(1)血清生化指标：①B组ICP模型的TBA、ALT、AST血清指标增高,与正常对照组A组相比较均有显著差异(P<0.05),但ICP模型B组与DMSO溶剂对照C组之间,上述三项生化指标均无明显差异(P>0.05)；②低浓度干预D组的TBA值明显降低,与C组比较有显著差异(P<0.05),而AST、ALT这两项指标无明显差异(P>0.05)；③高浓度干预E组的TBA、ALT、AST血清指标增高,与DMSO溶剂对照C组相比较均有显著差异(P<0.05)。(2)肝组织HE染色光镜下结果：：正常对照组,肝细胞结构清晰,肝小叶结构完整,无变性和坏死,肝窦扩张良好,无明显形态学改变。ICP模型组,部分肝细胞排列紊乱,肝细胞水肿变性,少量坏死,肝窦间隙狭窄明显,部分毛细胆管可见扩张和胆栓形成；(3)肝组织c-Jun的平均灰度值：免疫组化法检测组织的灰度值反映检测蛋白质的表达量,平均灰度值越高则该蛋白表达越少,反之,平均灰度值越低则该蛋白表达越多。免疫组化法检测B组ICP模型的c-Jun的灰度值明显降低,与正常妊娠A组相比较均有显著差异(P<0.05),而B组与DMSO溶剂对照C组的c-Jun灰度值相比较,无显著性差异(P>0.05)；但低浓度干预D组的c-Jun灰度值明显升高,与DMSO溶剂对照C组比较,有显著性差异(P<0.05)；高浓度干预E组的c-Jun平均灰度值明显高于C组和D组,均有显著性差异(P<0.05).(4) Western Blot检测肝组织Bsep、Ntcp蛋白的表达：Western Blot检测组织的灰度值反映检测蛋白质的表达量,平均灰度值越高则该蛋白表达越多,反之,平均灰度值越低则该蛋白表达越少。因此,Bsep、Ntcp的平均灰度值越高,Bsep、Ntcp的表达含量越高,反之,平均灰度值越低,则Bsep、Ntcp的表达含量越低。B组的平均灰度值均明显低于A组,两组相比较有显著差异(P<0.05),而B组和C组相比较差异无统计学意义(P>0.05)；D组的Bsep、Ntcp平均灰度值明显高于C组(P<0.05),E组的Bsep、Ntcp平均灰度值均明显高于C组和D组(P<0.05).结论：(1)JNK可能参与了雌激素下调肝细胞Bsep、Ntcp的表达,其机制可能是通过活化AP-1而发挥作用。(2)SP600125可能通过抑制雌激素下调肝细胞Bsep、Ntcp的表达,而降低胆汁淤积的程度。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
主要英文书写注释  11-12
前言  12-14
第一章 材料和方法  14-26
  1.1 研究对象与分组  14-15
  1.2 标本收集  15
  1.3 试剂  15-16
  1.4 主要仪器  16-17
  1.5 血清各生化指标检测  17
  1.6 HE染色过程  17
  1.7 肝脏组织c-Jun免疫组织化学法  17-19
  1.8 肝脏组织Bsep、Ntcp蛋白免疫印记法  19-25
  1.9 结果判断方法  25
  1.10 统计学方法  25-26
第二章 实验结果  26-32
  1 血清生化指标  26-27
  2 肝脏组织HE染色  27-28
  3 肝脏组织c-Jun的平均灰度值  28-30
  4 Western Blot检测肝组织Bsep、Ntcp蛋白的表达  30-32
第三章 讨论  32-37
  1 动物及动物模型的选择  32-33
  2 在ICP中雌激素对Bsep、Ntcp表达的影响  33-34
  3 雌激素对AP-1/c-Jun、JNK调节作用  34-35
  4 ICP中AP-1与JNK调节BSEP、NTCP的可能机制  35-37
结论  37-38
参考文献  38-42
综述  42-53
  参考文献  49-53
致谢  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 产科学 > 病理妊娠（异常妊娠）
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