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精索静脉曲张不育患者精子蛋白组学研究

作　者: 何犇
导　师: 唐伟
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 精索静脉曲张蛋白质组学精子
分类号: R698.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：(1)建立和优化精索静脉曲张（varicocele, VC）不育患者精子蛋白质组双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）技术；(2)利用2-DE对VC不育病人手术前后精子蛋白质进行分离，结合软件对比2-DE图谱，寻找差异蛋白质点；(3)利用获得的肽质量指纹图谱（PMF）检索差异蛋白质点进行数据分析处理，为更进一步深入研究VC导致不育的分子机制打下基础。方法：(1)提取VC不育患者精子蛋白，以clean-up kit法和丙酮沉淀法预处理蛋白提取物，分别采用不同上样量（200ug、250ug和300ug），不同胶条（pH3-10L、pH3-10NL和pH5-8），不同的水化方式进行双向电泳；(2)提取VC不育患者手术前后精子蛋白，以clean-up kit法预处理蛋白提取物，采用250ug的精子样品上样量，选取pH5-8的固相化pH梯度胶条和主动水化方式进行双向电泳；(3)运用PDQuest8.0双向凝胶图像软件分析比较VC不育患者手术前后的电泳图谱，寻找手术前后的差异蛋白质点；(4)将差异蛋白质点行飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)分析，将得到的肽质量指纹谱(PMF)进行数据库检索和生物信息学分析。结果：(1)同clean-up kit法进行比较，丙酮沉淀法预处理精子样品导致小分子量蛋白质的损失，且电泳图谱背景较深，影响蛋白分离效果；(2)pH3-10L线性固相化pH梯度胶条中蛋白主要集中在双向凝胶的中间区域，pH3-10NL非线性固相化pH梯度胶条使位于中间部位的蛋白点有所分开，而pH5-8胶条中蛋白点分布最均匀；(3)200ug上样量的图谱背景清晰，但获得的蛋白质点数最少；250ug上样量的双向电泳图谱蛋白点数较多，且图谱分辨率较高；300ug上样量的图谱蛋白点数虽然最多，横向条纹也较多；(4)与主动水化相比，被动水化后图谱的横纵向拖尾明显，背景不均一；(5)运用二维PDQuest双向凝胶分析软件比较发现：VC不育患者手术前组与术后组有20个差异蛋白，后续的质谱成功鉴定15个差异蛋白。结论：(1)通过比较发现，使用clean-up kit法对样品进行预处理，选取pH5-8的固相化pH梯度胶条，采用精子样品上样量250ug和主动水化方式可以获得背景清晰、分辨率高的图谱；(2)VC不育患者手术前后精子蛋白表达存在差异，这些蛋白质的上调或下调可能与VC患者导致不育有关，对术前与术后的差异蛋白质点的深入研究将对阐明VC导致男性不育的发病机制提供帮助。

全文目录

英汉缩略语名称对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-11
第一部分精索静脉曲张不育患者精子蛋白组双向电泳技术的建立与优化  11-25
  1 材料与方法  11-19
  2 结果  19-22
  3 讨论  22-24
  参考文献  24-25
第二部分精索静脉曲张不育患者精子差异蛋白质研究  25-40
  1 材料与方法  25-28
  2 结果  28-36
  3 讨论  36-38
  参考文献  38-40
全文总结  40-41
文献综述  41-48
  参考文献  46-48
致谢  48-49
攻读硕士学位期间发表的论文及参加课题会议  49-51

精索静脉曲张不育患者精子蛋白组学研究

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