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幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

作　者: 李翔
导　师: 张艳
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 幽门螺杆菌 NLRP3 caspase-1 IL-1β IL-18 ROS
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的:NLRP3（NACTH domain-leucine-rich repeat,and PYD-containing protein，NLRP3）炎症复合体能被多种激活剂所激活。活性氧(Reactive oxygen species，ROS)是激活NLRP3信号通路的信号之一。本实验以THP-1（人单核细胞）来源的巨噬细胞为模型，观察幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, H. pylori）对NLRP3炎症复合体活化的影响及ROS在其中的作用。方法:将THP-1细胞与H. pylori SS1共孵育，按照不同MOI（感染复数）200:1、100:1、50:1、25:1，并于0h、3h、6h、12h、24h收集培养上清及细胞，ELISA检测IL-1β和IL-18含量，FCM检测ROS的水平，Realtime-PCR检测NLRP3、caspase-1（cysteiny aspartate-specific protease-1，caspase-1）mRNA水平，Western blot检测caspase-1的表达情况。采用RNA干扰技术干扰NLRP3基因表达，观察NLRP3-siRNA对H. pylori诱导的IL-1β和IL-18分泌的影响。用25mM的ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）预处理THP-1细胞30min，再按照MOI=100:1加入H. pylori SS1处理，观察NAC预处理对H. pylori诱导的NLRP3、caspase-1mRNA表达以及IL-1β、IL-18分泌的影响。结果:(1) H. pylori能以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导THP-1细胞产生IL-1β和IL-18；用MOI为100:1的H. pylori刺激THP-1巨噬细胞，IL-1β在6h达到最高，IL-18在12h达到最高（P<0.05）；当MOI为200:1时，IL-1β和IL-18产生水平减少。(2) FCM检测结果显示，H. pylori能以时间依赖性方式诱导THP-1细胞产生ROS，其中于刺激6h达到高峰（p<0.01）；NAC预处理可明显清除H. pylori处理后THP-1细胞ROS产生（p<0.05），于3h、6h、12h、24h ROS荧光值分别减少6.79%、33.63%、19.59%、14.68%。(3) Realtime-PCR结果显示， H. pylori刺激THP-1细胞使细胞NLRP3、caspase-1mRNA表达均有表达，NLRP3mRNA于6h开始升高，12h达到高峰（p<0.05），caspase-1mRNA于3h开始升高，12h达到高峰（p<0.01）；NAC预处理后NLRP3（p<0.05）、caspase-1（p<0.01）mRNA表达水平降低。(4) Western blot结果显示，H. pylori刺激的THP-1细胞后caspase-1p10（10KD）的蛋白含量升高，于刺激12h含量达到高峰，与NAC处理前相比，抑制后各组含量下降。(5) NLRP3-siRNA转染细胞后，IL-1β和IL-18产生减少。结论:(1) H. pylori可诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18；(2) H. pylori通过ROS途径激活NLRP3炎症复合体。

幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

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