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BDNF在大鼠胚胎脊髓发育中与Wnt信号通路的关系研究

作　者: 周婷婷
导　师: 李力燕
学　校:
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: BDNF 脊髓神经元神经干细胞 Wnt
分类号: R338
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

[目的]探讨BDNF对体外培养的SD大鼠胚胎脊髓神经元、神经干细胞生长的影响,并探讨其与Wnt信号通路的关系。进一步阐明BDNF促进脊髓发育的机制,为临床治疗神经系统疾病提供重要依据。[方法]原代培养SD大鼠胚胎脊髓神经元和神经干细胞,并对其鉴定；BDNF过表达及干扰的单纯疱疹病毒(HSV)重组体转染原代培养SD大鼠胚胎脊髓神经元和神经干细胞(均分为正常组、对照组、BDNF过表达组和BDNF低表达组),分别于转染24、48和72小时计数各组神经元数量、胞体面积、突起长度(神经球数量、神经球面积、分化率),MTT检测神经元和神经干细胞的活力,Real timePCR检测Wnt信号通路相关因子的mRNA表达量,探讨BDNF对SD大鼠胚胎脊髓神经元和神经干细胞生长的影响,并探讨其与Wnt信号通路的关系。[结果]培养SD大鼠胚胎脊髓神经元和神经干细胞,并进行鉴定。转染培养的SD大鼠胚胎脊髓神经元和神经干细胞。1、BDNF对神经元生长发育的影响：(1)转染24h,各组神经元数量、胞体面积、最长突起长度和细胞活力比较,均没有统计学意义(P>0.05)。(2)转染48h, BDNF过表达组与对照组比较,神经元数量显著增加,神经元活力显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)；而BDNF低表达组与对照组比较,神经元数量显著减少,差异有统计学意义(P<0.01),最长突起长度显著减少,神经元活力明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)；各组神经元胞体面积比较均无明显变化,差异无统计学意义.(P>0.05)。(3)转染72h,镜下见一片荒芜,已无法统计。2、BDNF对神经干细胞生长发育的影响：(1)转染24h,各组神经球数量、球面积、分化率和细胞活力比较,均无统计学意义(P>0.05)。(2)转染48h,BDNF过表达组与对照组比较,神经球面积增大,细胞活力增高,差异有统计学意义(P<0.05),神经球数量和分化率没有变化(P>0.05)；而BDNF低表达组与对照组比较,神经球数量减少,神经球面积减小,分化率降低,差异有统计学意义(P<0.05),细胞活力没有变化(P>0.05)。(3)转染72h,BDNF低表达组与对照组比较,神经球数量减少,分化率降低,差异有统计学意义(P<0.05)；各组神经球面积、神经干细胞活力比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3、BDNF与Wnnt信号通路的关系：(1)神经元Real timePCR检测结果：BDNF过表达组与对照组比较,GSK-3β的表达明显减少(P<0.01),cyclinDl的表达显著增加(P<0.01),而BDNF低表达组与对照组比较,GSK-3β的表达明显增加(P<0.01), cyclinDl的表达显著减少(P<0.01),Wnt信号通路的其他因子各组比较无明显差异(P>0.05)。(2)神经干细胞Real timePCR检测结果：BDNF过表达组与对照组比较,GSK-3β的表达明显减少(P<0.01),cyclinDl的表达显著增加(P<0.01),而BDNF低表达组与对照组比较,GSK-3β的表达明显增加(P<0.01), cyclinDl的表达显著减少(P<0.05), Wnt信号通路的其他因子各组比较均无差异(P>0.05)。[结论]1、BDNF促进大鼠胚胎脊髓神经元存活、轴突生长。2、BDNF促进大鼠胚胎脊髓神经干细胞的增殖、分化。3、BDNF可能是通过抑制Wnt信号通路中GSK-3β的表达,刺激核内靶基因cyclinDl转录,进而促胚胎脊髓的生长、发育。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-11
前言  11-14
第一部分 SD大鼠胚胎脊髓神经元和神经干细胞的体外培养及鉴定  14-28
  材料与方法  14-24
  实验结果  24-28
第二部分 BDNF对SD大鼠胚胎脊髓发育的影响及其与Wnt信号通路的关系初探  28-68
  材料与方法  28-46
  实验结果  46-68
讨论  68-72
结论  72
参考文献  72-77
综述  77-85
  参考文献  81-85
读硕士学位期间的主要成果  85-86
致谢  86

BDNF在大鼠胚胎脊髓发育中与Wnt信号通路的关系研究

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