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福建锈毛莓抗炎保肝的药效机制研究

作　者: 邵丹
导　师: 魏道智
学　校: 福建农林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 锈毛莓肝炎双向电泳差异蛋白质组学
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

肝病已成为人类第9大杀手，肝病尤其是肝炎的治疗已成为医学界的重要研究课题，寻求安全有效的肝炎治疗药物是国内外医学界极为关注和研究的热点。我国历代用药实践和现代的大量研究成果表明：中医药治疗肝病，具有西药所不具备的多靶点、治调养结合和毒副作用小的特点，中医的治疗方法正被越来越多的中外医学专家和患者所接受和采用。中药悬钩子属植物锈毛莓具有抗菌消炎、活血化淤、去风湿、强筋骨之效，闽南民间广泛用于治疗各型肝炎，有良好的民间用药基础。本研究以福建上杭锈毛莓为材料，利用水提和有机溶剂浸提法对锈毛莓化学成分进行分离，一共获得6个组分，分别为锈毛莓水提物，锈毛莓醇提物，锈毛莓醇提石油醚部分，锈毛莓醇提氯仿部分，锈毛莓醇提乙酸乙酯部分，锈毛莓正丁醇部分。理化鉴定后发现这些组分含有黄酮类、皂苷类、多糖类、生物碱类和萜类物质。分别构建了小鼠耳肿胀模型和CCl₄肝损伤模型，对分离所得的6个组分分3个剂量梯度进行药效筛选，所得数据经Duncan’s Multiple-Range统计后发现最佳药效组分为锈毛莓醇提乙酸乙酯部分，其最佳用药剂量为3mg/kg。利用2-DE技术分离CCl₄肝损伤小鼠肝脏全蛋白，筛选出不同处理组差异表达蛋白点51个，经质谱鉴定含有39种蛋白质（表4.9）。这些蛋白大致可分为①小鼠CCl₄急性肝损伤胁迫相关的蛋白；②保肝抗氧化相关蛋白；③信号转导相关蛋白；④物质能量相关蛋白；⑤分子伴侣。利用生物信息学对以上蛋白质进行功能鉴定后，推测锈毛莓醇提乙酸乙酯组的药效机制可能为：诱使亚硫酸盐氧化酶、血清白蛋白上调表达，刺激谷胱甘肽的合成，增强机体内SOD的活性，祛除氧自由基，保护肝细胞膜不被氧化；调节赖氨酸、叶酸、鸟氨酸和S-腺苷-L-蛋氨酸的合成，提高机体的免疫力，在去除坏死肝细胞的同时刺激肝细胞的增生，加速肝组织的修复，保肝护肝，使ALT恢复正常水平，此外，酰基-CoA合成酶的上调减少了脂肪酸对肝细胞的伤害。磷脂酶和钙调素的发现说明磷脂酰肌醇信号途径参与了抗炎保肝作用。值得关注的是，实验中发现具有抑制细胞凋亡作用的葡萄糖调节蛋白78、线粒体热休克蛋白60上调表达，对导致肝纤维化具有重要作用的脯氨酰4-羟化酶下调表达。这些分子伴侣的差异表达说明锈毛莓醇提乙酸乙酯组分具有抗肝硬化的功效。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
第一章文献综述  10-19
  1 国内外肝炎治疗研究现状  10-13
    1.1 肝炎病理研究  10-12
    1.2 西医治疗肝炎发展现状  12-13
    1.3 中医治疗肝炎发展现状  13
  2 悬钩子属植物锈毛莓的研究现状  13-18
    2.1 悬钩子属植物的研究现状  13-16
    2.2 锈毛莓资源分布及应用研究  16-18
  3 本研究的内容、目的和意义  18-19
第二章福建锈毛莓药效组分的分离  19-25
  1 材料与方法  19-20
    1.1 试验材料  19
    1.2 试剂与仪器  19
    1.3 加热回流提取  19
    1.4 萃取分离  19-20
    1.5 萃取组分理化鉴定  20
  2 结果与分析  20-23
    2.1 各部分质量及提取率  20-21
    2.2 各分离成分的理化特征  21-23
  3 讨论  23-25
    3.1 提取条件的研究  23-24
    3.2 各萃取部分基本药效学推测分析  24-25
第三章福建锈毛莓药理学研究  25-37
  1 抗炎性药理研究  25-26
    1.1 材料与方法  25-26
      1.1.1 实验材料  25
      1.1.2 试剂与仪器  25
      1.1.3 小鼠耳肿胀模型的抗炎性实验  25-26
      1.1.4 数理统计  26
    1.2 结果与分析  26
  2 保肝性药理实验  26-34
    2.1 材料与方法  27-31
      2.1.1 实验材料  27
      2.1.2 试剂与仪器  27
      2.1.3 小鼠肝损伤模型保肝性实验  27-28
      2.1.4 小鼠血清的制备  28
      2.1.5 肝脏 ALT 活性测定  28-29
      2.1.6 肝脏 AST 活性测定  29-31
      2.1.7 数理统计  31
    2.2 结果与分析  31-34
  3 讨论  34-37
    3.1 锈毛莓提取物抗炎性分析  34
    3.2 锈毛莓提取物保肝性分析  34-37
第四章锈毛莓醇提乙酸乙酯部分药效机制研究  37-62
  1 材料与方法  37-44
    1.1 实验材料  37
    1.2 试剂与仪器  37
    1.3 肝脏 MDA（丙二醛）含量测定  37-38
    1.4 肝脏 SOD（超氧化物歧化酶）活性测定  38-39
    1.5 肝脏病理组织切片的制备与观察  39-40
    1.6 小鼠肝蛋白的提取  40
    1.7 肝蛋白电泳样品的制备  40-41
    1.8 蛋白质双向电泳  41-43
      1.8.1 第一向等电聚焦（IEF）  41-42
      1.8.2 SDS-PAGE 电泳  42-43
    1.9 凝胶染色成像  43
    1.10 凝胶图谱分析  43
    1.11 差异点获取与质谱鉴定  43-44
    1.12 数据库检索与生物信息学研究  44
  2 结果与分析  44-59
    2.1 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分对小鼠肝脏 MDA 含量和 SOD 活性的影响  44-45
    2.2 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分处理小鼠肝脏病理切片观察  45-47
    2.3 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分处理小鼠双向电泳图谱及差异分析  47-49
    2.4 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分处理小鼠差异蛋白质质谱鉴定结果  49-53
    2.5 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分处理小鼠蛋白质功能与差异表达分析  53-59
      2.5.1 小鼠 CCl_4急性肝损伤胁迫相关蛋白  53
      2.5.2 保肝抗氧化相关蛋白  53-55
      2.5.3 信号转导相关蛋白  55-56
      2.5.4 物质能量相关蛋白  56-57
      2.5.5 分子伴侣  57-59
  3 讨论  59-62
    3.1 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分保肝抗炎机制生理学研究  59-61
    3.2 锈毛莓醇提乙酸乙酯部分保肝抗炎机制蛋白质组学研究  61-62
第五章结论与展望  62-64
  1.1 结论  62-63
  1.2 展望  63-64
附录  64-73
参考文献  73-78
致谢  78

福建锈毛莓抗炎保肝的药效机制研究

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