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基于HPG轴功能变化对肾气丸“阴中求阳”配伍机制的研究

作　者: 陈功成
导　师: 李政木
学　校: 广州中医药大学
专　业: 方剂学
关键词: 肾气丸阴中求阳肾阳虚证配伍机制
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：本研究以肾阳虚证存在下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴)功能变化为基础,观察肾气丸各拆方组对氢化可的松所致肾阳虚型模型动物灌胃后体重、脏器重量指数、肛门温度、自主活动、抗疲劳和耐缺氧试验、病理HE染色结果以及血清中泌乳素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(Cor)的含量,进行肾气丸“阴中求阳”治疗肾阳虚证的配伍机制研究。根据中医学“肺肾相生”及“母子相及”理论,通过对各拆方组肾阳虚型COPD大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的测定,探求肾气丸“阴中求阳”治疗肾阳虚型肺功能疾病的临床应用,进一步探讨肾气丸“阴中求阳”治疗肾阳虚证的配伍机制。方法：将肾气丸拆方分为补阳组、补阴组、阴阳双补组。补阳组由附子、肉桂、茯苓、泽泻、牡丹皮组成；补阴组由熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮组成；阴阳双补组由附子、肉桂、熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、牡丹皮组成,即肾气丸全方组。将SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、模型组、拆方肾气丸组(对应上述肾气丸分组),除正常对照组外,其余各组大鼠每日大腿内侧肌肉丰厚处注射氢化可的松25mg/kg/d,连续12天,开始灌胃给药,正常对照组、模型组给予等体积生理盐水,连续20天。造模第1天,灌胃第1天、第21天称量各组大鼠体重。造模第11天,灌胃第10天、第20天测量各组大鼠肛温。造模第10天,灌胃第19天记录各组大鼠负重游泳时间。灌胃第21天上午麻醉大鼠,眼眶取血,静置,离心取上层血清,采用酶联免疫法(ELISA)检测血清PR、FSH、LH、E2、T、P、ACTH、Cor的含量；取睾丸、附睾、精囊、前列腺、肾上腺称重,计算脏器重量指数。同时取睾丸、肾上腺组织固定在10%的甲醛溶液中,石蜡切片,HE染色,常规观察病理改变。将KM雄性小鼠,随机分为正常对照组、模型组、拆方肾气丸组(对应上述肾气丸分组),除正常对照组外,其余各组小鼠每日腹腔注射氢化可的松0.25mg/kg/d,连续12天,开始灌胃给药,正常对照组、模型组给予等体积生理盐水,连续20天。造模第12天,灌胃第20天记录各组小鼠自主活动情况。灌胃第21天记录各组小鼠转棒和耐缺氧存活时间。将SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、模型组、拆方肾气丸组(对应上述肾气丸分组),除正常对照组外,其余各组大鼠每日大腿内侧肌肉丰厚处注射氢化可的松25mg/kg/d,连续12天。同时于造模第1至第28天,除正常对照组外,其余各组大鼠放入玻璃熏烟缸内,每天熏烟40分钟,一次16支烟。造模第1天、第14天,正常对照组大鼠气管注入200μ l生理盐水,其余各组大鼠气管注入脂多糖与生理盐水的混合液(200μ g/200μ l)。第29天开始灌胃给药,正常对照组、模型组给予等体积生理盐水,连续20天。灌胃第21天上午麻醉大鼠,眼眶取血,静置,离心取上层血清,采用ELISA法检测血清TNF-α的含量。成果：通过灌胃后体重、脏器重量指数、肛温、自主活动、抗疲劳、耐缺氧试验变化结果表明,肾气丸各拆方组中,以阴阳双补组症状改善最为明显,效果明显好于单纯补阳组或补阴组。补阳组与补阴组也能改善上述情况,但效果不如阴阳双补组明显,具有统计学意义。通过睾丸、肾上腺病理HE染色观察结果显示：正常对照组睾丸组织大致正常,曲细精管结构清楚,各级生精细胞存在,形态正常,间质未见明显异常。模型组睾丸曲细精管结构清楚,曲细精管内生精细胞退变明显,数量减少。与模型组相比,补阳组、补阴组、阴阳双补组睾丸曲细精管结构清楚,曲细精管内各级生精细胞增多,以阴阳双补组增多最为明显。正常对照组肾上腺分为皮质、髓质,皮质较厚,皮质可明确区分球状带、束状带、网状带。球状带、束状带细胞结构清晰,排列规则。模型组肾上腺皮质变薄,肾上腺皮质球状带、束状带变窄、结构不清。细胞排列不规则,细胞体积缩小、染色变浅,细胞质呈空泡状,细胞间隙变宽。补阳组、补阴组、阴阳双补组肾上腺皮质较厚,束状带占整个皮质的比例与正常组相近,细胞排列有序,形态接近于正常组,以阴阳双补组最明显。通过大鼠血清中PRL、FSH、 LH、 E2、T、P、ACTH、Cor、TNF-α含量测定结果表明,与正常对照组比较,模型组大鼠血清中T、ACTH、Cor含量明显降低,PRL、FSH、 LH、 E2、 P、 TNF-α含量明显升高,具有统计学意义。与模型组比较,补阳组大鼠血清中PRL、LH、P、TNF-α含量明显降低,具有统计学意义。补阴组大鼠血清中TNF-α含量明显降低,具有统计学意义。阴阳双补组大鼠血清中T、ACTH、Cor含量明显升高PRL, FSH、LH, E2, P, TNF-α含量明显降低,具有统计学意义。与补阳组比较,阴阳双补组大鼠血清中ACTH含量明显升高,具有统计学意义。与补阴组比较,阴阳双补组大鼠血清中PRL含量明显降低,ACTH含量明显升高,具有统计学意义。结论：肾气丸“阴中求阳”配伍主要由大量补肾生精、滋补肝肾药物配伍少量温阳药物而成,以少火生气,微微生火达到阴生阳长、温补肾阳之效。观察实验结果认为,增加血清中T、ACTH、Cor的含量,以及降低血清中PRL、FSH、LH、E2、P、TNF-α的含量,都可能是肾气丸“阴中求阳”治疗肾阳虚证的配伍机制。肾气丸“阴中求阳”配伍亦可能是通过降低血清中TNF-α的含量,在临床上治疗肾阳虚型肺功能疾病。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-9
目录  9-11
引言  11-13
第一章文献研究  13-28
  第一节肾气丸的研究概况  13-17
    一、历代医家对肾气丸的论述  13
    二、肾气丸现代临床研究  13-15
    三、肾气丸现代药理学研究  15-17
  第二节肾阳虚证的研究  17-19
    一、肾阳虚证理论的形成与发展沿革  17-18
    二、建国以来对肾阳虚证的诊断标准  18
    三、肾阳虚证的现代医学研究进展  18-19
  第三节肾阳虚证动物模型的研究  19-22
    一、肾阳虚动物模型的建立  19-20
    二、肾阳虚动物模型的实验研究概况  20-22
  第四节本课题的前期研究成果  22-23
  第五节本课题指标因子的选择  23-28
    一、泌乳素(PRL)  23
    二、卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)  23
    三、雌二醇(E_2)  23
    四、睾酮(T)  23
    五、孕酮(P)  23-24
    六、促肾上腺皮质激素(ACTH)与皮质醇(Cor)  24-25
    七、TNF-α与COPD  25-28
第二章实验研究  28-60
  第一节肾阳虚证动物模型应激性试验的观察  28-39
    提要  28-29
    一、对肾阳虚模型大鼠体重及脏器重量指数的影响  29-32
    二、对肾阳虚模型大鼠肛门温度的影响  32-33
    三、对肾阳虚模型小鼠自主活动的影响  33-34
    四、对肾阳虚模型动物抗疲劳机能试验的影响  34-37
    五、对肾阳虚模型小鼠耐缺氧存活时间的影响  37-38
    六、讨论  38-39
  第二节肾阳虚证动物模型组织形态学的观察  39-42
    提要  39-40
    一、材料与方法  40-41
    二、实验步骤  41-42
    三、实验结果  42
    四、讨论  42
  第三节肾阳虚证动物模型血清中相关因子的检测  42-60
    一、HPG轴相关因子的检测  42-51
    二、HPA轴相关因子的检测  51-55
    三、TNF-α的检测与COPD的关系  55-60
第三章结语  60-67
  第一节选题依据  60-61
  第二节研究内容  61
  第三节结果分析  61-64
  第四节展望  64-67
参考文献  67-73
附录  73-81
在校期间发表论文情况  81-82
致谢  82

基于HPG轴功能变化对肾气丸“阴中求阳”配伍机制的研究

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