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丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的氧化应激及腹膜间皮细胞凋亡因子表达的影响

作　者: 夏阳阳
导　师: 张苗
学　校: 南京医科大学
专　业: 临床医学
关键词: 丹参酮ⅡA 腹膜透析液氧化应激凋亡因子抑制凋亡因子
分类号: R459.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景及目的氧化应激是上调凋亡因子表达的重要因素之一，凋亡因子表达上调又可以启动细胞凋亡的发生，细胞凋亡对人体内组织纤维化包括腹膜组织纤维化的发生均起重要作用。腹膜纤维化是长期腹膜透析退出治疗的主要原因，而腹膜间皮细胞凋亡是导致纤维化始动的关键环节。本文观察丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡA，TSN）注射液对高糖腹膜透析液（peritoneal dialysis fluid，PDF）诱导体外培养人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells，HPMCs）氧化应激及凋亡的影响。方法选取人腹膜间皮细胞株进行体外培养，传代至第三代细胞用于实验。在培养的过程中以倒置显微镜观察细胞的形态变化。氧化应激指标检测分组：同步培养24h后分为：对照组（DEME培养基）、PDF组（4.25%PDF）、TSN组（含TSN终浓度为100μmol/L的DEME培养基）、TSN低浓度组（含TSN终浓度为50μmol/L的4.25%PDF）、TSN高浓度组（含TSN终浓度为100μmol/L的4.25%PDF），干预48h后，收集各组上清液，离心后用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法、二硫代二硝酸苯甲酸显色法检测上清液MDA、SOD、GSH浓度，并进行比较。细胞凋亡因子检测分组：同步培养24h后分为5组：对照组（DEME培养基）、H₂O₂组（3%H₂O₂）、TSN+H₂O₂组（含TSN终浓度为50μmol/L的3%H₂O₂）、PDF组（4.25%PDF）、TSN+PDF组（含TSN终浓度为50μmol/L的4.25%PDF），干预72h后，用实时荧光定量PCR（Real time PCR）和免疫印迹法（Western blot）分别检测凋亡因子bax、caspase-3及抑制凋亡因子bcl-2基因和蛋白的表达水平并比较。结果加入丹参酮ⅡA的各组较PDF组MDA的含量都明显降低，SOD、GSH的含量都显著升高。但丹参酮ⅡA不同浓度组间下调程度差异不明显。加入丹参酮ⅡA后的TSN+H₂O₂组和TSN+PDF组都分别较H₂O₂组和PDF组bax、caspase-3的mRNA及蛋白的表达量减少，bcl-2的mRNA及蛋白的表达量增加。结论TSN可能通过抑制氧化应激下调PDF诱导的HPMCs细胞凋亡因子高表达，从而延缓HPMCs的凋亡，保存HPMCs，具有潜在的抗腹膜纤维化作用。

全文目录

中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-13
材料与方法  13-27
  1、实验试剂及仪器  13-17
    1.1 实验试剂  13-14
    1.2 实验材料  14
    1.3 实验试剂的配制  14-17
  2、分组及实验方法  17-26
    2.1 HPMCs 的培养、传代  17-18
    2.2 HPMCs 的冻存及复苏  18-19
    2.3 上清液氧化应激相关指标检测  19
    2.4 Real Time PCR 检测人腹膜间皮细胞 bax、caspase-3、bcl-2 mRNA 的表达  19-22
    2.5 Western Blot 检测人腹膜间皮细胞 bax，caspase-3，bcl-2 蛋白的表达  22-26
  3、统计分析  26-27
结果  27-29
  1、HPMCs 细胞株的形态及变化  27
  2、MDA、SOD、GSH 检测结果  27
  3、Real Time PCR 结果  27-28
  4、Western Blot 结果  28-29
附图  29-34
讨论  34-38
结论  38-39
参考文献  39-43
文献综述  43-56
  参考文献  50-56
英文缩略词  56-57
攻读硕士期间发表的论文  57-58
致谢  58

丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的氧化应激及腹膜间皮细胞凋亡因子表达的影响

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