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肾消通络方对糖尿病肾病的防治作用及作用机制的研究

作　者: 刘洪彬
导　师: 王茹
学　校: 河北医科大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 糖尿病肾病肾消通络方 VCAM TGF-β1 Smad2/3 Smad7 CTGF FN
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察肾消通络方对糖尿病肾病大鼠的防治作用，以TGF-β1/Smad信号通路为核心研究肾消通络方的作用机制。方法：选用清洁级、雄性SD大鼠50只，体重200±20g，适应性饲养1周，随机选取10只为对照组(A组Control group)，40只为造模组。采用1次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法制作糖尿病模型，72h后，尾静脉取血测定造模组大鼠空腹血糖，高于16.7mmol/L者为成功糖尿病模型。对成功造模的大鼠进行完全随机分组：模型组(B组Model group)、厄贝沙坦组(C组Irbesartan group)、中药组(D组Shenxiao group)。次日起开始灌服给药，中药按生药20g/kg·d，厄贝沙坦按25mg/kg·d，模型组和对照组灌服等量蒸馏水，1次/天，给药共12周，自由饮食。12周末，尾静脉取血测定大鼠空腹血糖；使用代谢笼留取24h尿，测定尿微量白蛋白（mAlb）含量；腹腔注射10%水合氯醛麻醉动物，腹主动脉取血，离心，留取血清标本，-20℃保存，检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)、甘油三酯（TG）；左侧肾组织，4%多聚甲醛溶液固定，行HE、PAS染色，观察肾脏病理改变，采用免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管细胞黏附分子(VCAM)的表达；右侧肾组织皮质部切取1mm3组织固定于电镜液，电镜观察肾脏超微结构改变；右侧肾组织其余部分液氮保存，采用RT-PCR测定肾组织中TGF-β1mRNA的表达，采用Western blot测定肾组织中Smad2/3、Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维粘连蛋白(FN)的表达。结果：1肾消通络方对DN大鼠血糖的影响对照组血糖处于正常范围内，模型组、厄贝沙坦组、中药组血糖水平较对照组明显升高(P<0.05)，中药组血糖水平有下降趋势，但较模型组、厄贝沙坦组之间无统计学意义(P>0.05)。2肾消通络方对DN大鼠24h mAlb的影响模型组、厄贝沙坦组、中药组24h mAlb水平较对照组明显升高(P<0.05)，模型组较厄贝沙坦组、中药组24h mAlb水平明显升高(P<0.05)，厄贝沙坦组、中药组之间24h mAlb水平差异无统计学意义(P>0.05)。3肾消通络方对DN大鼠肾功能的影响模型组、厄贝沙坦组、中药组Scr、BUN水平较对照组明显升高(P<0.05)，模型组较厄贝沙坦组、中药组Scr、BUN水平明显升高(P<0.05)，厄贝沙坦组、中药组之间Scr、BUN水平差异无统计学意义(P>0.05)。4肾消通络方对DN大鼠肾血脂的影响模型组、厄贝沙坦组、中药组TC水平较对照组明显升高(P<0.05)，模型组较厄贝沙坦组、中药组TC水平明显升高(P<0.05)，厄贝沙坦组、中药组之间TC水平差异无统计学意义(P>0.05)。各组之间TG水平差异无统计学意义(P>0.05)，但中药组TG水平有下降趋势。5肾组织病理形态学观察HE染色：对照组肾小球、肾小管形体结构基本正常；模型组肾脏病理改变明显，肾小球基底膜明显增厚，细胞外基质积聚，系膜细胞增生；厄贝沙坦组和中药组较模型组病理改变减轻，两组间差异不明显。PAS染色：对照组肾小球形体结构基本正常，PAS阳性物质无明显增多；模型组肾脏病理改变明显，系膜区PAS阳性物质增多，红染明显，肾小球基底膜明显增厚，细胞外基质积聚；厄贝沙坦组和中药组病理改变较模型组减轻，PAS阳性物质较模型组有所减少。电镜观察：对照组肾小球基底膜结构基本正常，厚度均匀，足突结构正常，足细胞无调亡、脱落；模型组肾小球基底膜广泛增厚，部分节段明显，大量足突融合和缺失，部分足细胞丢失；厄贝沙坦组和中药组病理改变较模型组减轻，肾小球基底膜增厚不明显，足突融合较少。6肾消通络方对DN大鼠肾脏VCAM、TGF-β1表达的影响对照组VCAM、TGF-β1在肾小球，肾小管处均有少量表达；模型组、厄贝沙坦组、中药组VCAM、TGF-β1的表达水平较对照组明显升高，模型组在肾小球内可见VCAM、TGF-β1大量表达，在内皮细胞、系膜细胞处均呈现表达增高，在细胞外基质也有散在阳性表达；厄贝沙坦组和中药组VCAM、TGF-β1的表达水平较模型组有所降低，部分肾小球出现表达增高，整体水平较模型组呈现下调，厄贝沙坦组和中药组之间差异不明显。7肾消通络方对DN大鼠肾脏TGF-β1mRNA表达的影响模型组、厄贝沙坦组、中药组TGF-β1mRNA水平较对照组明显升高(P<0.05)，模型组较厄贝沙坦组、中药组TGF-β1mRNA水平明显升高(P<0.05)，厄贝沙坦组、中药组之间TGF-β1mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。8肾消通络方对DN大鼠肾脏Smad2/3、Smad7、CTGF、FN表达的影响模型组Smad2/3水平较对照组、厄贝沙坦组、中药组明显升高(P<0.05)，对照组、厄贝沙坦组、中药组之间Smad2/3水平差异无统计学意义(P>0.05)。厄贝沙坦组、中药组Smad7水平较对照组、模型组明显升高(P<0.05)，中药组Smad7水平较厄贝沙坦组明显升高(P<0.05)，对照组、模型组之间Smad7水平差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、厄贝沙坦组、中药组CTGF、FN水平较对照组明显升高(P<0.05)，模型组、中药组CTGF、FN水平较厄贝沙坦组明显升高(P<0.05)，模型组CTGF、FN水平较中药组明显升高(P<0.05)。结论：1肾消通络方可以减少24h mAlb，降低Scr、BUN水平，具有保护肾功能的作用。2肾消通络方可使TC水平降低，血糖、TG水平呈下降趋势。3肾消通络方能够减轻肾脏病理损伤，对肾脏组织具有保护作用。4肾消通络方能够下调肾脏TGF-β1mRNA及TGF-β1的水平，降低Smad2/3的水平，提高Smad7的水平，对TGF-β1/Smad信号通路的抑制作用可能是其作用机制之一。5肾消通络方能够降低肾组织中VCAM、CTGF、FN的水平，减少细胞外基质积聚，减轻肾脏纤维化，发挥肾脏保护作用。6肾消通络方与厄贝沙坦的肾脏保护作用效果相近，此外还具有一定的调节血脂、血糖的作用，可以改善血液环境。

肾消通络方对糖尿病肾病的防治作用及作用机制的研究

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