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大叶蛇葡萄黄酮提取物血清药化及其对心、肾的保护作用研究

作　者: 江灿
导　师: 张秀桥
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 大叶蛇葡萄 黄酮提取物 指纹图谱 血清药物化学 心、肾保护作用
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


大叶蛇葡萄(Ampelopsis megalophylla Diels et.Gilg)为葡萄科蛇葡萄属药用植物,湖北恩施地区民间将其加工成“霉茶”,为常用民间药。其性平,味酸、涩,具有清热凉血等功效；药理研究表明大叶蛇葡萄的提取物具有降血压和抗病毒的作用。通过查阅文献资料,本论文综述性地总结了指纹图谱以及血清药物化学研究现状；同时对高血压所致的靶器官损害以及降压药物对靶器官的保护作用亦做了综述性总结,为本实验奠定了基础。采用课题组前期有关大叶蛇葡萄黄酮提取物制备研究中的最优工艺,制备大叶蛇葡萄黄酮提取物。采用HPLC法测定并分析了来自湖北西部、湖南及重庆11批药材制备的提取物指纹图谱。具体色谱条件是色谱柱为Angilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长265nm,柱温为30℃,进样量为20μL。标定了10个共有指纹峰,并对蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷、槲皮苷四个峰进行了归属,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。建立了较规范的大叶蛇葡萄黄酮提取物的HPLC指纹图谱,为大叶蛇葡萄黄酮提取物的质量控制以及血清药化研究提供了依据。以大鼠为研究对象,采用中药血清药理学方法制备含大叶蛇葡萄黄酮提取物大鼠血清,以HPLC法建立并分析了血清药物化学成分图谱。将血清药物化学成分图谱与大叶蛇葡萄黄酮提取物图谱对照比较,结果提示有三个入血成分,确定其中一个为蛇葡萄素,其它两个成分有待进一步的研究。实验结果还提示大叶蛇葡萄黄酮提取物中含量较高的峰,吸收入血的比例相对也较高。本论文首次应用HPLC法进行大叶蛇葡萄黄酮提取物大鼠血清药物成分图谱研究,方法稳定可靠、重现性好,能较全面反映大叶蛇葡萄黄酮提取物经胃给药吸收入血药物成分的变化,为进一步研究大叶蛇葡萄黄酮提取物药效物质与代谢作用机制奠定了基础。选择自发性高血压大鼠(sHR),观察了大叶蛇葡萄黄酮提取物对高血压所致心、肾损害的保护作用。结果提示与模型组比较大叶蛇葡萄黄酮提取物中、低剂量组能显著降低SHR大鼠尿蛋白浓度、尿蛋白量、尿肌酐(Ucr)、血清肌酐(Scr);且中剂量组能显著增大24h尿量,降低尿素氮(BUN)；中、低剂量组肌酐清除率(Ccr)均有增大的趋势。病理观察显示大叶蛇葡萄黄酮提取物中、低剂量组有减轻肾小球毛细血管基底膜增厚及系膜细胞增生,延缓肾小球纤维化,减少血管周炎细胞的浸润的效果,推测大叶蛇葡萄黄酮提取物对SHR大鼠肾脏有一定的保护作用；各组心脏切片表现正常,心肌细胞横纹清晰,核居中,间质为少量血管及结缔组织,可见对心脏作用不明显。通过本实验研究,确定大叶蛇葡萄黄酮提取物中、低剂量组对肾脏可能有保护作用,对心脏的保护作用有待进一步研究。

全文目录


中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
英文缩略语  11-12
前言  12-13
第一章 大叶蛇葡萄黄酮提取物的指纹图谱研究  13-33
  1 仪器与试药  13-14
    1.1 仪器  13
    1.2 试剂  13
    1.3 对照品  13
    1.4 药材  13-14
  2 方法与结果  14-31
    2.1 供试品溶液的制备  14
    2.2 对照品溶液的制备  14
    2.3 系统试用性条件  14-16
    2.4 方法学考察  16-20
    2.5 方法学评价  20-25
    2.6 大叶蛇葡萄黄酮提取物HPLC指纹图谱的建立  25-27
    2.7 大叶蛇葡萄黄酮提取物HPLC指纹图谱的分析与评价  27-31
  3 讨论  31-33
第二章 大叶蛇葡萄黄酮提取物血清药物化学研究  33-40
  1 仪器与试药  33
    1.1 仪器  33
    1.2 试剂  33
    1.3 对照品  33
    1.4 药品  33
    1.5 动物  33
  2 血清样品的制备  33-35
    2.1 试药的制备  33-34
    2.2 给药方案的确定  34-35
  3 血清HPLC分析方法与结果  35-39
    3.1 提取物供试品溶液的制备  35
    3.2 对照品溶液的制备  35-36
    3.3 色谱条件  36
    3.4 方法学考察  36-38
    3.5 移行成分的确定与分析  38-39
  4 结果与讨论  39-40
第三章 大叶蛇葡萄黄酮提取物对心、肾保护作用研究  40-50
  1 仪器与试药  40
    1.1 仪器  40
    1.2 试剂  40
    1.3 动物  40
  2 实验方法  40-42
    2.1 分组与编号  40-41
    2.2 式实验  41
    2.3 生化指标的检测  41-42
    2.4 病理切片的观察  42
  3 结果与讨论  42-50
    3.1 肾保护生化指标结果  42-44
    3.2 肾脏病理切片结果  44-47
    3.3 心脏病理切片结果  47-48
    3.4 讨论  48-50
结语与创新  50-51
附录  51-65
  一、附图  51-56
  二、已发表和待发表论文  56-57
  三、文献综述  57-65
    1 指纹图谱概述  57-58
      1.1 指纹图谱的定义  57
      1.2 指纹图谱的构建方法  57
      1.3 大叶蛇葡萄指纹图谱研究概况  57-58
    2 含药血清制备方法的研究  58-60
      2.1 有机溶剂沉淀法  58-59
      2.2 酸法沉淀蛋白法  59
      2.3 重金属盐沉淀蛋白法  59
      2.4 热水浴法  59-60
      2.5 固相萃取法  60
    3 高血压与靶器官的损害研究进展  60-65
      3.1 高血压  60
      3.2 高血压对心脏的损害  60-61
      3.3 高血压对肾脏的损害  61
      3.4 高血压对大脑的损害  61-62
      3.5 高血压对眼底的损害  62
      3.6 药物对心脏保护作用  62
      3.7 药物对肾脏保护作用  62-65
参考文献  65-68
致谢  68

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