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决明子治疗糖尿病并发症的活性及氧化应激机制研究
作 者: 晋亚楠
导 师: 李学刚
学 校: 西南大学
专 业: 药物分析学
关键词: 决明子 糖尿病并发症 氧化应激
分类号: R284
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
糖尿病及并发症(Diabetes chronic complications, DCC)已成为一种严重危害人类健康的疾病。目前决明子对糖尿病并发症的治疗多为复方治疗,为了更好的研究药物的作用机制,本文主要研究单味中药决明子对糖尿病并发症的活性及机制研究。本研究的实验内容和研究结果如下:1、通过对近30年中药治疗糖尿病常见并发症的相关文献进行检索,总结出治疗糖尿病并发症的高频用药前74味,并对其进行四氧嘧啶诱导的动物模型筛选,以小鼠空腹血糖值、血液中醛糖还原酶活力、小鼠血清中SOD活力及MDA含量、肾体比为指标,选择了各个指标中活性较好的决明子进行研究,从而实现了从中药复方研究到单味中药活性及机制研究的转变。2、决明子提取分离后,利用HepG2细胞降糖实验和细胞ROS清除实验,针对治疗糖尿病并发症的统一机制—氧化应激机制,进行决明子中活性组分的筛选。结果表明,决明子醇提物四个萃取组分中,乙酸乙酯组分单位细胞的葡萄糖消耗量最多,对细胞ROS抑制率最强。进一步分离纯化乙酸乙酯组分,得到大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、大黄酸四个单体化合物,用上述方法进行活性筛选,结果显示,大黄酸和大黄素为有效活性物质,大黄素甲醚和大黄酚活性较低。3、将体外活性筛选出的乙酸乙酯组分及大黄素、大黄酸两种活性物质,进行糖尿病小鼠实验,以药物对糖尿病小鼠体重、饮食量、饮水量、小鼠空腹血糖值、血清中SOD活力及MDA含量、血液中AR活性的影响为指标,评价药物治疗糖尿病并发症的活性。结果表明,大黄酸活性比大黄素强,它在改善糖尿病小鼠体重、饮食饮水量及糖尿病小鼠的氧化应激水平方面都有较好的改善。由此可以推断,大黄酸和大黄素可能是决明子治疗糖尿病并发症的活性物质。4、对体外内活性较好的组分和物质进行氧化应激机制研究。ROS的产生是糖尿病并发症发生发展的核心,ROS的来源有多种,其最主要的来源是线粒体呼吸传递链的产物,因此研究药物对线粒体中活性氧的清除有助于对机制的进一步阐明。结果显示,大黄酸和大黄素对线粒体中ROS的产生均有很强的抑制作用,因此,阻断线粒体中活性氧的产生可能是该物质治疗糖尿病并发症的机制之一。
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全文目录
摘要 6-8 Abstract 8-10 第1章 文献综述 10-18 1.1 糖尿病及其并发症概况 10-11 1.1.1 糖尿病及其并发症现状 10 1.1.2 糖尿病并发症的分类 10-11 1.2 糖尿病并发症机制研究进展 11-13 1.2.1 多元醇通路的激活(PP) 11 1.2.2 糖基化终末产物的堆积 11-12 1.2.3 蛋白激酶(PKC)活性的增强 12 1.2.4 氧化应激 12 1.2.5 糖尿病并发症统一机制-氧化应激 12-13 1.3 糖尿病并发症的治疗药物 13-14 1.3.1 糖尿病并发症的西药治疗 13-14 1.3.2 糖尿病并发症的中药治疗 14 1.4 决明子研究进展 14-18 1.4.1 决明子的化学成分 14-15 1.4.2 决明子主要药理作用 15-16 1.4.3 决明子治疗糖尿病及其并发症 16-18 第2章 引言 18-20 2.1 研究的目的和意义 18 2.2 研究的主要内容 18-20 第3章 中药治疗糖尿病并发症的活性筛选 20-26 3.1 实验材料 20-21 3.1.1 实验药材 20 3.1.2 实验试剂 20 3.1.3 主要实验仪器 20 3.1.4 实验动物 20-21 3.2 实验方法 21-22 3.2.1 文献调研及中药统计 21 3.2.2 实验中药的配制 21 3.2.3 糖尿病小鼠模型的建立与分组 21 3.2.4 糖尿病小鼠血样处理 21 3.2.5 药物治疗糖尿病并发症各指标的检测 21-22 3.3 实验结果 22-24 3.3.1 治疗糖尿病并发症的中药使用频次统计 22-23 3.3.2 中药抑制糖尿病小鼠AR活性的筛选 23 3.3.3 中药对糖尿病小鼠氧化应激水平的筛选 23-24 3.3.4 中药对糖尿病小鼠肾体比的影响 24 3.4 讨论 24-26 第4章 决明子的提取分离及体外活性筛选 26-36 4.1 实验材料 26-27 4.1.1 实验药材 26 4.1.3 实验试剂 26 4.1.4 实验仪器 26-27 4.2 实验方法 27-29 4.2.1 中药决明子的提取分离 27 4.2.2 决明子各组分及成分的HepG2细胞葡萄糖消耗及MTT实验 27-29 4.2.3 细胞内活性氧(ROS)清除实验 29 4.2.4 统计方法 29 4.3 实验结果 29-33 4.3.1 决明子中分离物质的结构鉴定 29-30 4.3.2 决明子中组分及成分对HepG2细胞葡萄糖消耗及MTT的影响 30-32 4.3.3 决明子中组分及成分对细胞ROS的影响 32-33 4.4 讨论 33-36 第5章 决明子治疗糖尿病并发症的体内活性筛选 36-42 5.1 实验材料 36 5.2 实验方法 36 5.2.1 糖尿病小鼠分组及给药剂量 36 5.2.2 小鼠糖耐量实验 36 5.2.3 统计方法 36 5.3 实验结果 36-40 5.3.1 小鼠一般情况观察 36-37 5.3.2 决明子中各组分对小鼠体重的影响 37 5.3.3 决明子中各组分对小鼠饮水饮食量的影响 37-38 5.3.4 决明子中各组分对小鼠空腹血糖值的影响 38-39 5.3.5 决明子中组分及成分对小鼠糖耐量的影响 39-40 5.3.6 决明子中组分及成分对糖尿病小鼠SOD活力、MDA含量及AR的影响 40 5.4 讨论 40-42 第6章 决明子治疗糖尿病并发症氧化应激机制研究 42-46 6.1 实验材料 42 6.1.1 实验试剂 42 6.1.2 实验仪器 42 6.2 实验方法 42-43 6.2.1 线粒体提取的缓冲液的制备 42 6.2.2 线粒体的制备方法 42-43 6.2.3 反应体系中溶液的配置 43 6.2.4 线粒体活性氧清除实验方法 43 6.3 实验结果 43-45 6.4 讨论 45-46 第7章 结论、创新点与展望 46-48 7.1 结论 46-47 7.2 创新点 47 7.3 展望 47-48 参考文献 48-54 研究生期间发表的学术论文 54-56 附录 56-58 致谢 58
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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