学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鱿鱼墨黑色素铁促进骨髓造血及作用机制的研究

作　者: 柳东
导　师: 王静凤
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产品加工与贮藏工程
关键词: 鱿鱼墨黑色素铁 毒理学评价 缺铁性贫血 Raf-1/MEK/ERK通路 机能性贫血 粒单系集落刺激因子 促红细胞生成素
分类号: TS254.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 1次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


鱿鱼墨黑色素(Squidinkmelanin,Me)是以吲哚结构为主体的异聚物，能螯合多种金属离子。黑色素铁(Squidinkmelanin-Fe,Me-Fe)是利用其络合特性制备的异聚物螯合铁。北太平洋鱿鱼是主要的鱿鱼加工品种，在我国东南沿海产量很高，鱿鱼墨的高值化利用尚未引起重视。本论文从鱿鱼墨中提取了高纯度黑色素，通过生物络合制备了黑色素螯合铁，系统研究了黑色素铁的安全毒理学性质；通过建立缺铁性贫血(Irondeficiencyanemia,IDA)模型和机能性贫血模型，研究了黑色素铁改善贫血的作用及作用机制；另外，采用外翻肠囊法和体内法研究了黑色素铁的消化吸收特点。主要研究结果如下：鱿鱼墨黑色素铁安全无毒。小鼠经口急性毒性试验显示，实验动物没有出现中毒症状，无一例死亡，经口最大耐受量大于18000mg/kg·bw，属无毒级别；遗传毒性试验（Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验）的结果均为阴性，表明黑色素铁没有明显的致突变性；30d喂养实验显示，黑色素铁对大鼠血液生化学和尿液生化学指标均无显著影响，说明其对大鼠肝脏、肾脏和心血管等器官无明显毒性损伤。鱿鱼墨黑色素铁具有显著地改善缺铁性贫血和促进红系造血的作用。结果显示，黑色素铁能显著提高IDA大鼠红细胞数(RBC)数、血红蛋白(Hb)含量、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)，增加血清铁(SI)和血清促红细胞生成素(EPO)含量，有效降低血清总铁结合力(TIBC)和红细胞内游离原卟啉(FEP)含量。同时，与无机铁相比，鱿鱼墨黑色素铁易被机体吸收利用，生物利用度高。采用体外骨髓细胞培养和集落培养的方法对黑色素铁促进骨髓造血的作用途径进行了探讨，结果表明：黑色素铁能显著提高粒单系祖细胞集落产率、红系祖细胞集落产率，对巨核系祖细胞集落产率无影响。RT-PCR结果显示，黑色素铁能显著上调骨髓细胞粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyre-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)、促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)mRNA的表达，对血小板生成素(thrombopoietin,TPO)mRNA表达无影响。提示鱿鱼墨黑色素铁可诱导机体造血微环境合成、分泌GM-CSF、EPO等造血生长因子，促进骨髓粒单系、红系造血细胞增殖分化，改善缺铁性贫血症状。利用RT-PCR的方法检测了IDA大鼠骨髓细胞中ERK信号通路关键蛋白激酶和核内因子c-Jun、c-Fos的mRNA表达，对其促进红系造血的作用机制进行探讨。结果表明：鱿鱼墨黑色素铁能提高大鼠骨髓细胞中Raf-1/MEKs/ERKs和核内因子c-Jun、c-Fos的基因表达。提示鱿鱼墨黑色素铁可以通过增强Raf-1/MEK/ERK信号转导通路，有效地调控红系细胞增殖分化以保证EPO/EPOR生物效应的发挥，达到促进红系造血的目的。采用连续3次腹腔注射环磷酰胺的方法建立小鼠机能性贫血模型，研究鱿鱼墨黑色素铁对小鼠骨髓造血功能的影响。结果表明，鱿鱼墨黑色素铁可显著促进骨髓粒单系和红系祖细胞增殖，对巨核细胞增殖无影响；诱导体内合成分泌GM-CSF、EPO造血生长因子，促进骨髓粒单系、红系造血；促进小鼠外周血WBC、RBC数量和Hb含量的恢复。采用大鼠外翻肠囊法结合体内法初步探讨了鱿鱼墨黑色素铁在大鼠体内的消化吸收特点。结果表明，黑色素铁可以整体的形式被肠粘膜上皮细胞所摄取，灌胃后2h大鼠血清铁浓度达到最高。综上所述，鱿鱼墨黑色素铁安全性高，可促进骨髓粒单系和红系造血，可通过Raf-1/MEK/ERK信号通路调控红系造血，可以整体形式被肠道摄取。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-14
前言  14-23
  1 缺铁性贫血概述  14-17
    1.1 缺铁性贫血的形成  14
    1.2 缺铁性贫血的危害  14-15
    1.3 缺铁性贫血的防治及补铁剂应用现状  15-17
  2 骨髓造血过程  17-20
    2.1 造血干/组细胞  17-18
    2.2 影响造血调控的细胞因子  18-19
    2.3 红系造血调控  19-20
  3 鱿鱼墨黑色素及黑色素铁的研究概况  20-21
    3.1 鱿鱼墨黑色素的结构特点及理化性质  20
    3.2 鱿鱼墨黑色素的生理活性  20-21
    3.3 鱿鱼墨黑色素铁的研究进展  21
  4 立题依据及研究的目的和意义  21-23
第一章 鱿鱼墨黑色素铁的安全性评价  23-38
  第一节 鱿鱼墨黑色素铁的急性毒性实验  23-26
    1 材料和方法  23-25
      1.1 材料  23-24
      1.2 实验方法  24-25
      1.3 统计学分析  25
    2 结果和讨论  25-26
      2.1 最大耐受量的确定  25
      2.2 对小鼠外周血象的影响  25
      2.3 对小鼠血清BUN、Cr、AST和ALT含量的影响  25-26
    3 小结  26
  第二节 鱿鱼墨黑色素铁的遗传毒性试验  26-31
    1 材料和方法  27-29
      1.1 材料  27
      1.2 实验方法  27-28
      1.3 统计学分析  28-29
    2 结果和讨论  29-30
      2.1 对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102突变的影响  29
      2.2 对小鼠骨髓细胞PCE/RBC比值和微核率的影响  29-30
      2.3 对小鼠精子畸形率的影响  30
    3 小结  30-31
  第三节 鱿鱼墨黑色素铁的大鼠30天喂养实验  31-38
    1 材料和方法  31-33
      1.1 材料  31-32
      1.2 实验方法  32-33
      1.3 统计学分析  33
    2 结果和讨论  33-37
      2.1 一般行为观察  33
      2.2 对大鼠外周血象的影响  33-34
      2.3 对血液生化学指标的影响  34-37
    3 小结  37-38
第二章 鱿鱼墨黑色素铁改善大鼠缺铁性贫血的活性研究  38-58
  第一节 鱿鱼墨黑色素铁对大鼠缺铁性贫血的改善作用  38-49
    1 材料与方法  38-42
      1.1 材料与仪器  38-39
      1.2 实验方法  39-42
      1.3 统计学分析  42
    2 结果  42-47
      2.1 IDA模型大鼠的一般行为观察  42
      2.2 鱿鱼墨黑色素铁对IDA大鼠体重的影响  42-43
      2.3 外周血涂片的观察与分析  43-44
      2.4 对大鼠RBC、Hb、HCT及MCV的影响  44-45
      2.5 对IDA大鼠SI、TIBC及FEP的影响  45-46
      2.6 对IDA大鼠血清EPO的影响  46
      2.7 对鱿鱼墨黑色素铁的吸收  46-47
    3 讨论  47-48
    4 小结  48-49
  第二节 鱿鱼墨黑色素铁对大鼠造血调控因子活性及mRNA表达的影响  49-58
    1 材料与方法  49-52
      1.1 材料与仪器  49-50
      1.2 实验方法  50-52
      1.3 统计学分析  52
    2 结果  52-56
      2.1 对大鼠集落刺激因子活性的影响  52-53
      2.2 对大鼠粒-单系祖细胞集落形成的影响  53-54
      2.3 对大鼠红系祖细胞集落形成的影响  54-55
      2.4 对大鼠巨核系祖细胞集落形成的影响  55
      2.5 对大鼠骨髓细胞GM-CSFmRNA表达的影响  55-56
      2.6 对大鼠骨髓细胞EPORmRNA表达的影响  56
      2.7 对大鼠骨髓细胞TPOmRNA表达的影响  56
    3 讨论  56-57
    4 小结  57-58
第三章 鱿鱼墨黑色素铁通过促进大鼠红系造血作用机制的研究  58-64
  1 材料与方法  58-60
    1.1 材料与仪器  58-59
    1.2 实验方法  59-60
    1.3 统计学分析  60
  2 结果  60-62
    2.1 对骨髓细胞中ERK通路关键基因mRNA表达的影响  60-61
    2.2 对骨髓细胞转录因子c-Jun和c-FosmRNA表达水平的影响  61-62
  3 讨论  62-63
  4 小结  63-64
第四章 鱿鱼墨黑色素铁对机能性贫血小鼠造血调控的影响  64-71
  1 材料与方法  64-66
    1.1 材料  64-65
    1.2 实验方法  65-66
    1.3 统计学分析  66
  2 结果  66-68
    2.1 对小鼠外周血象动态变化的影响  66-67
    2.2 对血清GM-CSF、EPO和TPO含量的影响  67-68
    2.3 对小鼠粒-单系祖细胞集落形成的影响  68
    2.4 对小鼠红系祖细胞集落形成的影响  68
    2.5 对小鼠巨核系祖细胞集落形成的影响  68
  3 讨论  68-69
  4 小结  69-71
第五章 鱿鱼墨黑色素铁体内消化吸收的初步研究  71-75
  1 材料与仪器  71-72
    1.1 材料  71
    1.2 试剂  71
    1.3 仪器  71
    1.4 主要试剂的配制  71-72
  2 实验方法  72-73
    2.1 外翻肠囊法  72
    2.2 体内法  72-73
  3 实验结果  73
    3.1 肠囊液铁的变化  73
    3.2 血清铁的变化  73
  4 讨论  73-74
  5 小结  74-75
结论  75-76
本论文的特色及创新之处  76-77
参考文献  77-86
致谢  86-87
个人简历  87-88
发表的学术论文  88-89

相似论文

  1. 促红细胞生成素对大鼠坐骨神经损伤后背根神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响,R651.3
  2. 促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后BrdU、Nestin表达的影响,R722.1
  3. 促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后BrdU、GFAP表达的影响,R722.1
  4. 重组人促红细胞生成素对高糖状态下体外培养视网膜神经细胞凋亡的保护作用及Bcl-2蛋白表达的影响,R966
  5. 重组人促红细胞生成素对高糖作用下体外培养视网膜神经细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响,R774.1
  6. 促红细胞生成素对神经血管单元缺血缺氧损伤后的血管新生和神经保护作用研究,R743.3
  7. 促红细胞生成素对大鼠心肌梗死心脏保护性作用实验研究,R542.22
  8. 上海地区贫血人群铁补充效果研究,R151
  9. 促红细胞生成素改善大鼠心肺复苏后心功能不全机制的研究,R541.78
  10. 褐藻蛋白多糖铁的研制及其药效学研究,R285.5
  11. 1300例儿童血中微量元素及血铅水平对自身健康影响的研究,R179
  12. 革皮氏海参总皂苷促进小鼠骨髓造血机能的作用及其机制的研究,R285.5
  13. 转基因牛乳腺生物反应器表达的重组人乳铁蛋白食用安全性和功能研究,R151
  14. 骨髓间充质干细胞移植联合促红细胞生成素提高心梗后心功能的实验研究,R542.22
  15. EPO及其受体在直肠癌中的表达及临床意义,R735.37
  16. 烧伤后SD大鼠脑组织HSP27表达和细胞凋亡变化及EPO干预的影响,R644
  17. 非铁剂健脾益气补血法治疗缺铁性贫血的临床研究,R272
  18. 促红细胞生成素在血液系统疾病中的临床分析,R556
  19. 甲基强的松龙与促红细胞生成素联合应用对原代星形胶质细胞作用的研究,R329
  20. 非铁剂健脾补血中药复方对缺铁性贫血铁代谢的干预研究,R285
  21. 相同剂量rHuEPO一次与两次给药治疗肾性贫血的疗效观察,R692.5

中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 水产加工工业 > 基础科学
© 2012 www.xueweilunwen.com