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中国明对虾繁殖和免疫相关功能基因的重组表达和免疫组织化学研究

作　者: 温荣
导　师: 李富花
学　校: 中国科学院研究生院（海洋研究所）
专　业: 海洋生物学
关键词: 中国明对虾 功能基因 重组表达 抗体制备 免疫组化
分类号: S945
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


重组表达是对阐明基因功能的重要技术之一。本论文在前期对对虾重要功能基因进行研究的的基础上，选取了中国明对虾免疫调节通路中的重要转录因子：Relish、Dorsal以及对虾卵巢发育密切相关基因：细胞凋亡易感性蛋白（cell apoptosis susceptibility protein, CAS）和精原干细胞生成因子（spermatogonial stem cell renewal factor，SSCRF）进行了重组表达研究，优化了这四种重要基因的原核重组表达技术，获得了它们的重组表达蛋白，并制备了多克隆抗体，利用免疫组织化学技术研究了CAS和SSCRF在对虾性腺中的分布。利用大肠杆菌表达系统成功得到了His-Relish、His-Dorsal、GST-CAS和GST-SSCRF融合蛋白，分子量分别为30kDa、39kDa、39kDa、44kDa。分别利用His Trap FF crude Kit和MagneGST Protein Purification System对四种重组蛋白进行了纯化，获得重组蛋白的纯品。将纯化后的His-Relish、His-Dorsal融合蛋白免疫兔子，获得兔抗His-Relish和兔抗His-Dorsal的多克隆抗血清。另将纯化后的GST-CAS和GST-SSCRF融合蛋白免疫小鼠，制备了鼠抗GST-CAS和鼠抗GST-SSCRF的多克隆抗体。经Western Blot检测，发现获得的多克隆抗体均能与目的抗原发生特异的抗原-抗体反应。利用制备获得的鼠抗GST-CAS和鼠抗GST-SSCRF多克隆抗体研究了CAS和SSRF在二倍体对虾和三倍体对虾性腺中的分布，结果表明：（1）. CAS广泛分布在二倍体对虾卵巢卵母细胞的细胞质及细胞核周围。说明CAS可能通过参与对虾卵巢细胞的细胞质与细胞核之间的物质运输过程调控对虾卵母细胞的发育；（2）. SSCRF存在于二倍体对虾的精巢和三倍体对虾的卵巢细胞中，而在二倍体对虾卵母细胞中不存在。这一结果说明SSCRF可能与三倍体对虾卵巢发育异常有关。以上研究为进一步阐明所研究基因在对虾免疫和卵巢发育中的作用机制奠定了重要基础。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-9
第一章 文献综述  9-32
  第一节 前言  9-11
  第二节 对虾的功能基因组学研究  11-15
    1.2.1. EST  12-13
    1.2.2 cDNA微阵列  13-15
    1.2.3 蛋白组研究  15
  第三节 重组表达  15-22
    1.3.1 原核表达系统  16-18
    1.3.2 真核表达  18-22
  第四节 基因功能研究及利用  22-26
    1.4.1 重组表达蛋白的活性分析  23
    1.4.2 抗体、免疫组织化学及抗体封闭  23-24
    1.4.3 RNAi  24-26
  第五节 对虾功能基因的研究  26-32
    1.5.1 免疫相关功能基因的研究  26-29
    1.5.2 卵巢发育重要功能基因的研究  29-32
第二章 对虾功能基因的重组表达  32-47
  第一节 Relish的重组表达  32-36
    2.1.1 材料和方法  32-34
    2.1.2 结果  34-36
  第二节 Dorsal 的重组表达  36-39
    2.2.1 材料和方法  36-38
    2.2.2 结果  38-39
  第三节 CAS和 SSCRF 的表达  39-46
    2.3.1 材料和方法  39-42
    2.3.2 结果  42-46
  讨论  46-47
第三章 多克隆抗体制备及检测  47-52
  第一节 Relish蛋白和Dorsal蛋白多克隆抗体的制备  47-49
    3.1.1 材料和方法  47-48
    3.1.2 结果  48-49
  第二节 CAS和 SSCRF 多克隆抗体的制备  49-50
    3.2.1 材料和方法  49-50
    3.2.2 结果  50
  讨论  50-52
第四章 免疫组织化学分析  52-61
  第一节 CAS的免疫组化  52-57
    4.1.1 材料和方法  52-55
    4.1.2 结果  55-56
    4.1.3 讨论  56-57
  第二节 SSCRF的免疫组织化学  57-61
    4.2.1 材料和方法  57-58
    4.2.2 结果  58-59
    4.2.3 讨论  59-61
结论  61-62
参考文献  62-75
硕士期间发表论文  75-76
致谢  76-77

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 甲壳类病虫害及其防治
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