学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

猪链球菌2型对氟喹诺酮类抗生素耐药性的机制研究

作　者: 何彩美
导　师: 胡庭俊; 杨威
学　校: 广西大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 猪链球菌2型氟喹诺酮类药物耐药机制诱导性耐药
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 88次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

猪链球菌病是当今世界养猪业的主要细菌传染病之一。最普遍的致病性血清型是2型,能引起猪的败血症、心内膜炎、脑膜炎、脓毒性关节炎、肺炎等,感染人类会引起败血症、心内膜炎和脑膜炎,严重会导致死亡。氟喹诺酮类药物是临床上广泛应用于治疗细菌感染的一类高效、广谱的人工化学合成药物,也是猪链球菌病的有效治疗药物之一,但是由于人医和兽医在临床上长期广泛使用以及不合理应用,其耐药性也随之产生并且逐渐增强。猪链球菌2型(SS2)对氟喹诺酮类药物的耐药机制很少有报道。为了探讨SS2耐氟喹诺酮类药物的机制,本研究对4株对诺氟沙星和恩诺沙星敏感的SS2进行诺氟沙星和恩诺沙星的耐药诱导,通过体外耐药诱导,将诺氟沙星和恩诺沙星的MIC提高至256μ g/mL。通过研究亲本株和各自诱导至高度耐药菌株的DNA旋转酶(gyrA)(?)(?)拓扑异构酶Ⅳ(parC)的氟喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)氨基酸变异情况、耐药菌株外排泵检测、耐药质粒的检测和消除、耐药质粒能否接合转移到大肠杆菌等方面探讨SS2耐氟喹诺酮类药物的机制。本试验还研究了耐不同氟喹诺酮类药物的SS2是否有交叉耐药性以及SS2在获得耐药性以后,其毒力和致病性是否会发生改变,为防治SS2提供理论依据。利用PCR方法从15株临床分离的猪链球菌菌株中扩增出6株为SS2,占分离总菌数的40%。通过微量稀释法测定了恩诺沙星和诺氟沙星对6株菌株的MIC,结果有4株对这两种药物敏感,2株耐药。采用体外递增药物浓度的方法对4株敏感株分别进行人工诱导产生恩诺沙星和诺氟沙星的耐药性,结果成功诱导出高度耐药菌株8株,两种药物对各自所诱导出来的菌株MIC为256μ g/mL。应用PCR方法对SS2敏感株和耐药株的gyrA和parC基因QRDR进行扩增、测序分析,结果发现75%的人工诱导耐药菌株(6/8)在parC的QRDR发生E83的突变,其他位点无共同性变化；在gyrA中,氨基酸的变化也无共同性,说明本试验诱导的耐药菌株,其药物作用靶基因的靶位突变不是细菌高度耐药的主要原因。检测耐药菌株质粒存在后,进行耐药质粒接合转移和消除试验。耐药质粒的接合转移试验结果显示,大肠杆菌DH5。没有获得SS2的耐氟喹诺酮类药物质粒；应用SDS一温度交替法对耐药菌株进行质粒消除后,耐药菌株对恩诺沙星和诺氟沙星的敏感性均有显著增加,对耐药质粒消除试验后的菌株进行质粒的提取,发现耐药菌株的质粒片段均有丢失。耐药菌株的交叉耐药性试验结果表明耐不同氟喹诺酮类药物的SS2之间存在着氟喹诺酮类药物的交叉耐药性。耐药菌株的外排泵初步检测试验结果显示,不同浓度的外排泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)分别与恩诺沙星、诺氟沙星联合应用后,都能显著恢复耐药菌株的药物敏感性。细菌毒力因子表型检测和小白鼠致病性试验结果显示,亲本株和各自诱导耐药菌株的毒力基因表型没有发生变化；对小白鼠的致病性也未发生改变,表明猪链球菌2型的毒力和致病性不会因为耐药性的产生而降低或加强。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-16
第一章文献综述  16-25
  1 猪链球菌2型简介  16
  2 喹诺酮类药物  16-18
    2.1 喹诺酮类药物的分类  16-17
    2.2 氟喹诺酮类药物药动学特征  17
    2.3 氟喹诺酮类药物的作用机制  17-18
  3 猪链球菌对氟喹诺酮类抗生素的耐药机制  18-20
    3.1 靶位变异  18
    3.2 主动外排泵作用  18-19
    3.3 质粒介导  19-20
  4 猪链球菌对氟喹诺酮类抗生素耐药研究进展  20-21
  5 控制和减少细菌耐药性问题的对策  21-24
    5.1 合理使用抗生素  21-22
    5.2 开发新的药物  22-24
  6 本研究的目的意义  24-25
第二章 SS2的临床分离及鉴定  25-30
  1 材料与方法  25-26
    1.1 材料  25
    1.2 方法  25-26
  2 结果  26-28
    2.1 细菌的形态及培养特性  26
    2.2 生化反应  26-27
    2.3 猪链球菌2型的鉴定  27-28
  3 讨论  28-30
    3.1 猪链球菌2型的分离鉴定  28-29
    3.2 猪链球菌2型的生化试验  29-30
第三章人工体外诱导SS2对氟喹诺酮类药物耐药  30-34
  1 材料与方法  30-31
    1.1 材料  30
    1.2 方法  30-31
  2 结果  31-32
    2.1 恩诺沙星和诺氟沙星对6株菌株体外最小抑菌浓度(MIC)测定  31
    2.2 人工体外诱导猪链球菌2型氟喹诺酮类药物耐药菌株  31-32
  3 讨论  32-34
    3.1 猪链球菌对氟喹诺酮类药物耐药情况和产生原因  32
    3.2 药物浓度与细菌耐药性  32-34
第四章 SS2氟喹诺酮类药物耐药基因的扩增、克隆和测序  34-43
  1 材料与方法  34-36
    1.1 材料  34
    1.2 方法  34-36
  2 结果  36-41
    2.1 猪链球菌2型氟喹诺酮类药物耐药基因的PCR扩增  36-37
    2.2 QRDR序列分析  37-41
  3 讨论  41-43
第五章 SS2氟喹诺酮类药物耐药质粒的消除和接合转移试验  43-50
  1 材料与方法  43-45
    1.1 材料  43
    1.2 方法  43-45
  2 结果  45-48
    2.1 耐药质粒的检测和消除  45-48
    2.2 耐药质粒接合转移  48
  3 讨论  48-50
    3.2 耐药质粒的消除  48-49
    3.3 耐药质粒的接合转移  49-50
第六章人工诱导SS2氟喹诺酮类药物耐药菌株交叉耐药性试验  50-52
  1 材料与方法  50
    1.1 材料  50
    1.2 方法  50
  2 结果  50
  3 讨论  50-52
第七章人工诱导SS2氟喹诺酮类药物耐药菌株外排泵初步检测  52-55
  1 材料与方法  52-53
    1.1 材料  52
    1.2 方法  52-53
  2 结果  53-54
    2.1 CCCP对猪链球菌2型耐药菌株的MIC  53
    2.2 CCCP对猪链球菌2型耐药菌株的影响  53-54
  3 讨论  54-55
第八章 SS2的毒力和致病性试验  55-61
  1 材料与方法  55-56
    1.1 材料  55
    1.2 方法  55-56
  2 结果  56-59
    2.1 猪链球菌2型毒力因子PCR检测  56-58
    2.2 致病性试验  58-59
  3 讨论  59-61
    3.1 我国猪链球菌2型毒力基因流行现状  59-60
    3.2 猪链球菌耐药性与毒力之间的关系  60-61
第九章结论  61-62
参考文献  62-69
致谢  69-70
攻读学位期间发表论文情况  70

猪链球菌2型对氟喹诺酮类抗生素耐药性的机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文