学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

PTHrP及其受体在梅花鹿茸角中的表达与调节

作　者: 王守堂
导　师: 岳占碰
学　校: 吉林大学
专　业: 基础兽医学
关键词: PTHrP PPR 梅花鹿鹿茸
分类号: S825
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 33次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本实验以梅花鹿为研究对象，利用原位杂交方法检测了PTHrP及其受体在梅花鹿茸角中的表达。结果表明，PTHrP mRNA在梅花鹿茸角的表皮层几乎没有表达，在真皮层有较强的表达，主要表达在真皮成纤维细胞上，而在毛囊细胞、皮脂腺细胞和血管周围细胞内均未检测到PTHrP的表达。PTHrP mRNA在鹿茸的软骨膜上有较高的表达，主要在软骨膜的纤维状细胞上有表达，而在血管周围细胞中未见表达。PTHrP mRNA在鹿茸间充质层中未见表达，在软骨层细胞中有极高的表达量，主要表达在软骨小梁内处于增殖状态的软骨细胞和成软骨细胞中，在软骨小梁周围的血管沟细胞中也有很高的表达量。PPR mRNA在鹿茸组织中的表达位置与PTHrP基本相似，仅在部分组织中存在差异。PPR mRNA在表皮层中有适量表达，主要表达在表皮层的基底细胞和棘细胞层的角蛋白分泌细胞中，在真皮层中表达量较高，毛囊细胞、皮脂腺细胞和血管周围细胞内均未检测到阳性信号的存在，在软骨膜上的纤维状细胞中可见较强的阳性信号。间充质层没有表达，软骨层内的表达主要集中在软骨小梁内处于增殖状态下的软骨细胞，成骨细胞和软骨小梁周围的血管沟细胞中。分离梅花鹿鹿茸组织的软骨细胞，利用体外细胞培养技术，添加PTHrP（1-34）及几种可能参与PTHrP发挥作用的特异性信号通途抑制剂，研究PTHrP对鹿茸软骨细胞分化的影响以及其可能的作用机制。细胞试验结果表明，将培养至第3天的鹿茸软骨细胞换液除去未贴壁细胞，在倒置显微镜下观察鹿茸软骨细胞。培养的鹿茸软骨细胞呈三角型或多边形，细胞呈克隆样生长，贴壁的细胞增殖迅速。台盼兰染色结果显示，培养的细胞的活性在90%以上。HE染色发现，部分细胞呈纺锤形或梭形。实时荧光定量PCR的结果显示，在经PTHrP（1-34）单独处理后的软骨细胞中，Col II mRNA的表达水平没有明显的变化，然而Col IX mRNA的表达量随着处理时间的延长而逐渐降低并且在24h到达最低点，且呈现出一定的时间依赖效应，Col X mRNA表达量的变化情况与Col IX相似，也呈现出一定的时间依赖效应。将传代培养的第2代软骨细胞先分别用一些信号通路抑制剂预处理2h后，再外源添加PTHrP（1-34）处理不同的时间（0-24h）。用实时定量荧光PCR法检测软骨细胞中Bcl-2、Cyclin D1和Runx2mRNA的表达量变化。结果显示，经PTHrP（1-34）单独处理后，在鹿茸软骨细胞中Bcl-2mRNA的表达量逐渐升高，在12h到达最高点；然而，在添加了H-89（10μM，PKA抑制剂），SB203850（10μM，p38MAP激酶抑制剂）和U0126（10μM，MEK抑制剂）的实验组中，PTHrP对Bcl-2mRNA表达的促进效应被显著地抑制；SP600125（10μM，JNK抑制剂）只是轻微地下调了PTHrP对Bcl-2mRNA表达的促进效应，而添加GF109203X（10μM，PKC抑制剂）则几乎对Bcl-2mRNA的表达没有影响。经PTHrP（1-34）单独处理后，在鹿茸软骨细胞中Cyclin D1mRNA的表达量逐渐升高，并且Cyclin D1mRNA表达量的变化情况与Bcl-2相似，在12h到达最高点；在添加了H-89和GF109203X的实验组中，PTHrP对Cyclin D1mRNA的促进效应被显著地抑制；SB203850和SP600125只是轻微地下调了PTHrP对Cyclin D1mRNA表达的促进效应，而U0126则几乎对Cyclin D1mRNA的表达没有影响。经PTHrP（1-34）单独处理后，在鹿茸软骨细胞中Runx2mRNA的表达量逐渐降低，在24h到达最低点；在添加了H-89、SB203850、U0126和LY294002（10μM，PI3K抑制剂）的实验组中，PTHrP对Runx2mRNA表达的抑制效应被显著地减弱，而在添加GF109203X组中，阻断剂对PTHrP对Runx2mRNA表达的抑制作用几乎没有影响。这些试验结果将为进一步研究梅花鹿鹿茸再生及快速生长的分子调节机制提供重要理论依据。

全文目录

内容提要  4-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-13
英文缩略词表  13-14
第一篇文献综述  14-23
  1 初角茸的发育  14-16
  2 鹿茸角周期性再生的调节机理  16-17
  3 鹿茸角的脱落  17-18
  4 鹿茸角芽基的形成  18
  5 软骨和骨的生长  18-20
    5.1 间充质生长区  19
    5.2 鹿茸软骨  19-20
  6 鹿茸角的形成  20-21
  7 PTHrP 在鹿茸角再生过程中的作用  21-23
第二篇研究内容  23-52
  第1章 PTHRP 及其受体在梅花鹿茸角中的表达  23-40
    1 材料和方法  23-31
      1.1 材料  23-24
      1.2 鹿茸的取材  24
      1.3 原位杂交  24-31
    2 结果  31-38
      2.1 目的基因的克隆和探针制备  31-34
      2.2 PTHrP 及其受体在梅花鹿茸角中的表达  34-38
    3 讨论  38-40
  第2章 PTHRP 对梅花鹿鹿茸软骨细胞分化的影响  40-52
    1 材料与方法  40-44
      1.1 材料  40
      1.2 方法  40-44
    2 结果  44-49
      2.1 梅花鹿鹿茸软骨细胞的分离培养  44
      2.2 PHTrP 对鹿茸软骨细胞 Col II、Col IX 和 Col X 表达的影响  44-45
      2.3 PHTrP 对梅花鹿鹿茸软骨细胞 Bcl-2 表达的影响  45-47
      2.4 PHTrP 对梅花鹿鹿茸软骨细胞 Cyclin D1 表达的影响  47-48
      2.5 PHTrP 对梅花鹿鹿茸软骨细胞 Runx2 表达的影响  48-49
    3 讨论  49-52
结论  52-53
参考文献  53-62
导师及作者简介  62-63
发表的学术论文  63-64
致谢  64

PTHrP及其受体在梅花鹿茸角中的表达与调节

内容摘要

全文目录

相似论文