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介导玉米DNA的水稻变异株系染色体行为及遗传分析

作　者: 王海莎
导　师: 姬生栋
学　校: 河南师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 水稻染色体变异蛋白质水解酶
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本研究对介导玉米DNA的7个变异株系连续世代遗传分离规律进行分析，并对初步稳定的变异株系的染色体行为和叶片中蛋白水解酶表达进行研究，旨在揭示外源DNA介导创造的水稻变异材料的遗传规律；以及从染色体水平揭示变异与染色体的内在联系；通过蛋白水解酶分析，揭示变异材料经过多代自交、分离、选育，不仅性状保留变异特征，而且有新的蛋白表达，为远缘分子育种提供重要的理论数据。变异株世代分离表现为： T1代变异单株出现1个新性状，其后代稳定较快，单株出现2个或2个以上新性状，其后代稳定较慢，即T1代变异单株表现的新性状类型较多，后代稳定较慢；表现同一新性状的T1代变异单株，达到稳定遗传的世代有差异。初步稳定的变异株系染色体行为表现为：花粉母细胞减数分裂染色体出现多种畸变类型，染色体滞后、染色体桥、环状染色体、染色体排列散乱等；变异单株出现的新性状多，其减数分裂染色体畸变类型多，畸变率高；3.花粉母细胞减数分裂在形成四分体时，个别二分体未进行分裂。叶片中蛋白水解酶表达结果为：在pH=4.5时，变异株系E（10-8(+2)-131-1-1）检出77、200、212kD三条新酶带；在pH=8.5时，变异株系检测检出77、212、234kD三条新酶带且酶活很强，说明介导玉米DNA可能引起受体水稻某些基因表达。在pH=7.0时，变异株系E检测到一条220kD与对照玉米一致的酶带，并检出66.2、231kD两条条酶活较强的酶带，说明已稳定遗传的变异株系中可能整合有玉米DNA。总之，从遗传上看，初步稳定的变异材料其后代趋于稳定，染色体畸变率还高的变异材料说明变异材料并未绝对稳定，后代还会发生一定的分离，表达水平上来的看，有与玉米一致的目的酶带，说明玉米基因导入到水稻受体中，本研究的结果为后续分子研究打下了基础，还需进一步在DNA水平从根本上解释外源DNA导入受体中。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
第一章绪论  9-17
  1.1 水稻遗传转化研究概况  9-12
    1.1.1 农杆菌介导法  9-10
    1.1.2 离子束介导法  10
    1.1.3 基因枪法  10-11
    1.1.4 花粉管介导法  11
    1.1.5 转基因与生物安全  11-12
  1.2 远缘分子育种技术  12-14
    1.2.1 水稻远缘分子杂交技术程序  12-13
    1.2.2 水稻远缘分子杂交技术的特点  13
    1.2.3 水稻远缘分子杂交技术的进展  13-14
  1.3 遗传规律研究进展  14
  1.4 植物远缘杂交种异常染色体行为研究进展  14-15
  1.5 蛋白水解酶  15
  1.6 论文研究的主要内容、目的和意义  15-17
第二章材料和方法  17-25
  2.1 材料  17-18
  2.2 实验仪器及试剂  18-20
    2.2.1 实验仪器  18-19
    2.2.2 实验试剂  19
    2.2.3 试剂配制  19-20
  2.3 实验方法  20-25
    2.3.1 表型统计  20
    2.3.2 根尖预处理和固定  20-21
    2.3.3 用铬酸处理的超净载玻片  21
    2.3.4 盖玻片的处理  21
    2.3.5 花粉母细胞染色体制片  21-22
    2.3.6 染色体畸变率统计处理  22
    2.3.7 复性电泳法  22
    2.3.8 蛋白水解酶活性测定和分子量计算  22-25
第三章结果与分析  25-37
  3.1 遗传性状分析  25-27
  3.2 染色体行为分析  27-31
  3.3 蛋白水解酶表达分析  31-33
  3.4 讨论  33-37
第四章结论  37-39
参考文献  39-45
致谢  45-47
攻读学位期间发表的学术论文目录  47-48

介导玉米DNA的水稻变异株系染色体行为及遗传分析

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