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苘麻提取物对南方根结线虫生物活性测定及活性成份的分离

作　者: 谢宁
导　师: 李丽芳; 苏秀荣
学　校: 山东农业大学
专　业: 农药学
关键词: 苘麻南方根结线虫杀根结线虫活性
分类号: S482.51
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

根结线虫病是许多蔬菜上发生的最严重病害之一，尤其在保护地蔬菜栽培中，常造成严重的产量损失。根结线虫不仅造成农作物减产，而且能够加重土传真菌性病害和部分细菌性病害的发生。对于根结线虫的防治，除了利用抗病寄主、轮作和物理防治以外，化学防治是控制蔬菜根结线虫病的重要措施。传统的熏蒸性和非熏蒸性化学杀线虫剂多为高毒、高残留的农药，不仅对环境污染严重，而且使用过程中对人、畜也不安全，其中许多杀线虫剂已陆续被禁用。寻找和开发新的高效、低毒、低残留、高选择性的杀线虫剂已成当务之急。本文以南方根结线虫为靶标，采用室内离体生物活性测定的方法，对苘麻甲醇提取物碱水萃取组分中杀线虫成分进行了研究，以期为环境友好线虫剂的研究和开发提供理论研究。主要研究结果如下：1.苘麻不同溶剂提取物对南方根结线虫的生物活性存在显著差异。采用不同溶剂对苘麻进行了浸提，得到石油醚、甲醇、乙酸乙酯、水等4种不同浸提物，进行杀线虫活性试验。结果显示，处理浓度为50mg/ml和25mg/ml时，以蒸馏水提取物杀线虫活性最强，48h线虫校正死亡率都达到100%，甲醇提取物次之，48h线虫校正死亡率都达到90%，乙酸乙酯、石油醚提取物使线虫死亡率低。用由强到弱的排列顺序为：水取组分>甲醇提取组分>乙酸乙酯提取组分>石油醚提取组分。2.苘麻粗提物的碱水层杀线虫活性突出。对苘麻甲醇提取物进行生物碱的粗分离，得到3个组分，分别是碱水层、氯仿一层和氯仿二层。三个组分的杀线虫活性分别是碱水层>氯仿一层>氯仿二层，碱水层杀线虫活性极高，干粉浓度为200mg/ml的24h和48h校正死亡率都是100%。3.苘麻萃取组分杀线虫活性差异明显。对苘麻碱水层进行极性从小到大的萃取分离，分离出12个组分，发现A5氯仿:甲醇(4:1)和A8组分氯仿:甲醇(1:2)杀线虫活性强。A5组分48h的干粉浓度500mg/ml、250mg/ml和125mg/ml时线虫校正死亡率都达100%，而A8组分干粉浓度500mg/ml和250mg/ml线虫校正死亡率都达到100%，干粉浓度125mg/ml时线虫校正死亡率也高达93.2%。4.通过生物活性追踪的方法首次对苘麻甲醇提取物水萃取组分中的对南方根结线虫具有活性的物质进行了系统研究。采用硅胶柱层析和气质联用等技术从中分离得到2个较纯化组分。并对2个较纯化组分运用气质联用进行分析。分析结果显示：有效物质可能是油酸和亚油酸。5.进行苘麻粗提物的大棚实验。结果表明苘麻粗提物对番茄根结线虫有良好的防治效果，苘麻药液浓度为1%、0.5%和0.25%时效果都很显著。具体表现是根结数少，番茄苗鲜重增长率大，根部增长率明显。

全文目录

符号说明  4-7
中文摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
1 前言  11-27
  1.1 根结线虫的发生与危害  11-12
  1.2 根线虫的防治现状  12-18
    1.2.1 农业防治  13-14
    1.2.2 物理防治  14-15
    1.2.3 抗病育种  15
    1.2.4 生物防治  15-16
    1.2.5 微生物源及植物源农药防治  16-18
    1.2.6 化学防治  18
  1.3 化学杀线虫剂的发展与研究现状  18-19
  1.4 生物碱研究概况  19-23
    1.4.1 生物碱的分类  20
    1.4.2 生物碱在植物界的分布  20-21
    1.4.3 生物碱在植物分类学上的意义  21-22
    1.4.4 生物碱的应用前景  22
    1.4.5 生物碱的提取与分离  22-23
    1.4.6 生物碱的检测  23
  1.5 其他植物源杀线虫化合物  23-26
  1.6 苘麻的研究进展  26
  1.7 本研究的目的意义  26-27
2 材料与方法  27-33
  2.1 试验材料  27
  2.2 主要仪器和试剂  27-28
  2.3 方法  28-33
    2.3.1 南方根结线虫的培养  28
    2.3.2 植物粗提物的制备  28
    2.3.3 甲醇浸提物的粗分离  28-29
    2.3.4 碱水层有效物质的分离  29
    2.3.5 纯化物质化合物结构鉴定  29-30
    2.3.6 苘麻粗提物大田试验  30-32
    2.3.7 生物活性测定方法（药液浸泡法）  32
    2.3.8 室内毒杀活性测定方法  32
    2.3.9 生物碱性质测试  32-33
3 结果与分析  33-47
  3.1 不同溶剂的提取率  33
  3.2 不同溶剂提取物对线虫的生物活性  33-35
  3.3 苘麻叶粗分离物对线虫活性  35
  3.4 温度、光照对苘麻叶粗提液杀线虫活性的影响  35-36
  3.5 苘麻不同萃取组分对线虫活性  36-37
  3.6 A5和A8纯化组分的化学成分分析  37-43
    3.6.1 A5组分的纯化  37-39
    3.6.2 A8组分的纯化  39-40
    3.6.3 A5、A8化学组分分析  40-42
    3.6.4 油酸和亚油酸杀线虫活性实验  42-43
  3.7 苘麻粗提液对房村大棚根结线虫的防治效果  43-47
    3.7.1 对番茄地上部植株增长的影响（第一次试验）  43
    3.7.2 对番茄根长增长的影响（第一次试验）  43-44
    3.7.3 对番茄根结数的影响（第一次试验）  44-45
    3.7.4 对番茄根结数的影响（第二次试验）  45-47
4 讨论  47-49
  4.1 植物源杀线虫物质的活性追踪、提纯与结构改造  47
  4.2 植物源杀线虫物质的协同作用  47-48
  4.3 苘麻初步研究成果  48
  4.4 苘麻作为环境友好杀线虫剂的开发途径  48
  4.5 有待进一步研究的问题  48-49
5 结论  49-50
参考文献  50-59
致谢  59-60
发表论文  60

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