学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

致病疫霉拮抗放线菌的筛选与利用

作　者: 王岩
导　师: 蒋继志
学　校: 河北大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 致病疫霉放线菌发酵产物稳定性
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 28次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界四大粮食作物之一,我国是世界最大的马铃薯生产基地之一。马铃薯在世界粮食生产中占有非常重要的地位,联合国将2008年命名为“国际马铃薯年”。马铃薯生产的发展一直受到一些真菌病害的严重威胁,尤其是马铃薯晚疫病,造成马铃薯的严重减产甚至绝产。从微生物代谢产物中寻找控制有害生物的生物农药是当前新农药研究开发的一个重要途径。放线菌是最早用于生物防治的微生物,其中最具生防价值的放线菌是链霉菌(Streptomyces spp.)。本研究着重在于从土壤中筛选出高效拮抗致病疫霉的放线菌,并对其发酵产物在离体组织上的生防作用、稳定性及理化性质进行初步研究,为分离纯化该抗菌物质打下基础,为今后开发田间有效控制马铃薯晚疫病的高效、稳定的生物农药提供理论依据。对马铃薯晚疫病及其他真菌病害的有效控制也具有重要的指导意义和参考价值。本研究取得的主要结果如下：1采取薯块夹病叶法采集样品和薯片诱导分离法分离晚疫菌株,利用选择性培养基(SRA)从192个采集的样品中,成功分离出共97个晚疫病菌株,平均成功率达到了51%。2从来自5个地区的9个类型的土样中分离纯化出了84株(种)放线菌,通过活体和发酵液抑菌实验,发现其中36个菌株对致病疫霉具有明显的拮抗作用,抑菌率达到65%以上。NB8活体菌株和发酵液的抑菌活性均为最高,其活体抑菌率为97.33%,发酵液的抑菌率为92%。3探讨了NB8菌株发酵液在马铃薯离体组织上的防病作用,在块茎和离体叶片上的生防实验均显示,该菌株发酵液原液对晚疫病具有显著的预防作用,预防效果在块茎上的病情指数为22.19%,在离体叶片上病情指数为63.43%；其治疗作用均较弱。但预防和治疗效果均优于实验室前期筛选出来的梨黑斑病菌(Alternaria kikuchiana A204)和白菜黑斑病菌(Alternaria brassicicola A206)发酵液的效果。4根据NB8菌株的形态特征、培养特征以及生理生化特性的鉴定,初步将其定为白色链霉菌(Streptomyces albus)。5确定了NB8菌株的最佳发酵培养时间,种子液发酵5d、扩大培养10d时的抑菌率最高(93%),之后随着时间的延长抑菌率稍有下降。6明确了不同环境条件及连续传代对NB8菌株发酵产物抑菌活性的影响。发酵产物受环境条件的影响较小,见光不易分解,30W紫外灯垂直距离30cm照射10h后仍保持81.2%的抑菌率,在高温100℃条件下仍保持很高的抑菌活性(78.67%),pH6-8时对致病疫霉的抑制作用最强(92%),pH偏低或偏高都会对发酵产物的活性有削弱作用,可在室温下贮藏60d,且连续传代10代后抑菌活性基本保持不变。7 NB8发酵产物经90%乙醇预处理后,进行了纸层析分析。根据Dosko溶剂系统初步将发酵液活性物质定为非碱性水溶性抗生素；Betina溶媒系统层析发现发酵液活性成分在水中Rf值最大,说明其极性较大,初步将活性组分归为水溶性抗生素一族；pH纸层析发现其Rf值随pH的增加而减小,与酸性抗生素的pH层析图谱大致相似,推断其活性组分为酸性物质。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-13
1 前言  13-27
  1.1 致病疫霉  13-15
    1.1.1 无性繁殖  13
    1.1.2 有性繁殖  13-14
    1.1.3 生理小种  14-15
  1.2 马疫铃薯晚病  15-17
    1.2.1 概述  15-16
    1.2.2 病害症状  16
    1.2.3 发病条件及发病规律  16-17
  1.3 马铃薯晚疫病的防治现状  17-21
    1.3.1 农业防治  17
    1.3.2 抗病育种  17-18
    1.3.3 化学防治  18-19
    1.3.4 生物防治  19-21
  1.4 生防菌研究概况  21-23
    1.4.1 细菌  21-22
    1.4.2 真菌  22-23
    1.4.3 放线菌  23
  1.5 微生物源抗菌物质  23-26
    1.5.1 细菌产生的抗菌物质  23-25
    1.5.2 真菌产生的抗菌物质  25
    1.5.3 放线菌产生的抗菌物质  25-26
  1.6 本研究的目的和意义  26-27
2 材料与方法  27-36
  2.1 材料  27-28
    2.1.1 供试菌种及培养  27
    2.1.2 供试生测植物  27
    2.1.3 培养基  27
    2.1.4 试验试剂  27-28
    2.1.5 试验仪器  28
  2.2 致病疫霉的采集以及分离纯化  28-29
    2.2.1 病样采集  28
    2.2.2 致病疫霉的分离纯化以及保存  28-29
  2.3 放线菌的土样采集、菌种分离纯化  29
    2.3.1 采集土样  29
    2.3.2 放线菌的分离纯化  29
  2.4 拮抗放线菌的筛选  29-30
  2.5 拮抗放线菌的分类地位的鉴定  30-33
    2.5.1 形态特征  30
    2.5.2 培养特征的观察  30-31
    2.5.3 生理生化特性测定  31-32
    2.5.4 16S rDNA序列测定  32-33
  2.6 拮抗放线菌发酵时间的初步考察  33
  2.7 拮抗放线菌发酵产物的稳定性研究  33-34
    2.7.1 光稳定性试验  33
    2.7.2 热稳定性试验  33
    2.7.3 酸碱稳定性试验  33
    2.7.4 室温储藏稳定性试验  33-34
    2.7.5 传代稳定性试验  34
  2.8 拮抗放线菌活性代谢产物的鉴别  34-36
    2.8.1 活性代谢产物的初步确定  34
    2.8.2 发酵液预处理方式的选择  34
    2.8.3 极性试验  34-36
3 结果与分析  36-48
  3.1 致病疫霉的采集以及分离纯化  36
  3.2 放线菌的土样采集与菌株分离纯化  36-37
  3.3 拮抗放线菌的筛选  37-40
    3.3.1 活体筛选  37-38
    3.3.2 发酵液筛选  38-39
    3.3.3 离体组织实验  39-40
  3.4 拮抗放线菌的分类地位的确定  40-43
    3.4.1 菌株NB8形态特征  40-41
    3.4.2 培养特征的观察  41
    3.4.3 生理生化特性测定  41-42
    3.4.4 16SrDNA的PCR扩增结果  42-43
  3.5 拮抗放线菌发酵时间的确定  43
  3.6 拮抗放线菌发酵产物的稳定性研究  43-45
    3.6.1 光照  43-44
    3.6.2 温度  44
    3.6.3 pH  44
    3.6.4 室温储藏  44-45
    3.6.5 连续多次传代  45
  3.7 拮抗放线菌活性代谢产物的初步分析  45-48
    3.7.1 活性代谢产物的初步确定  45-46
    3.7.2 发酵液预处理方式的选择  46
    3.7.3 极性试验  46-48
4 讨论  48-50
  4.1 致病疫霉的采集及分离纯化  48
  4.2 拮抗放线菌的分离纯化及筛选  48-49
  4.3 拮抗放线菌分类地位的鉴定  49
  4.4 拮抗放线菌NB8发酵产物稳定性的研究  49
  4.5 拮抗放线菌NB8活性代谢产物的鉴别  49-50
结论  50-51
参考文献  51-59
附录一  59-62
附录二  62-63
致谢  63

致病疫霉拮抗放线菌的筛选与利用

内容摘要

全文目录

相似论文