学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

西尼罗河病毒重组杆状病毒和重组慢病毒的构建

作　者: 徐敏
导　师: 毕丁仁
学　校: 华中农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 西尼罗河病毒 杆状病毒 prME基因 慢病毒
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 19次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


西尼罗河病毒(West Nile virus, WNV)属黄病毒科黄病毒属成员,是一种通过蚊子传播的嗜神经病原体。该病毒常常可引起人和大量动物的发病和死亡。自从1999年首次到达纽约,西尼罗河病毒在后来几年内已遍及北美各地。鉴于没有可用的抗病毒药物治疗该疾病,各个国家纷纷选择研发有效疫苗预防该疾病。尽管我国目前未发现人或动物感染西尼罗河病毒,但我国具备该病毒流行和传播条件。为了强化我国在该领域的技术储备和预防未来可能暴发的疫情,展开疫苗研究有重要意义。本研究的主要内容如下：1.构建表达西尼罗河病毒prME基因的重组杆状病毒BglⅡ和NotⅠ双酶切真核表达质粒pc-prME得到CMV-prME片段,CMV-prME连接BamHⅠ和NotⅠ双酶切转移质粒pFastBac-VSV/G,得到真核表达转移质粒pFastBac-G-prME。将该转移质粒转化大肠杆菌DH10Bac,通过三种抗性、两种半乳糖苷筛选白色菌落得到重组杆状病毒质粒Bacmid-G-prME,然后通过脂质体的方法转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒rBV-G-prME。将该重组杆状病毒转导BHK-21细胞,通过间接免疫荧光和’Western Blotting分析证明西尼罗河病毒prME基因在哺乳动物细胞内表达。2.慢病毒载体介导表达西尼罗河病毒prME基因将西尼罗河病毒(WNV)的主要免疫原性基因prME插入到HIV-1慢病毒载体中,构建转移质粒pHR-prME。然后,在脂质体介导下,将转移质粒与pΔ8.2、pVSV/G共转染293T细胞,48h后收获细胞上清。将上清转导正常293T细胞后,通过报告基因荧光观察、间接免疫荧光观察,结果证明：利用HIV-1慢病毒载体系统包装得到了假型病毒,可以高效转导293T细胞,且在转导细胞内实现WNV/prME基因表达。

全文目录


摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
缩写  9-11
一 文献综述  11-18
  1.1 西尼罗河病毒病的流行病学  11-13
    1.1.1 西尼罗河病毒病的历史与地理格局  11
    1.1.2 传染源  11-13
    1.1.3 西尼罗河病毒的传染途径  13
    1.1.4 西尼罗河病毒的传染性  13
  1.2 西尼罗河病毒病的诊断  13-14
    1.2.1 抗原检测  13-14
    1.2.2 抗体检测  14
  1.3 西尼罗河病毒病的疫苗  14-15
  1.4 杆状病毒表达载体系统  15-16
    1.4.1 杆状病毒表达载体系统  15
    1.4.2 哺乳动物/杆状病毒表达载体系统  15-16
    1.4.3 杆状病毒表达载体系统用于疫苗  16
  1.5 慢病毒载体系统  16-18
    1.5.1 慢病毒载体系统  16
    1.5.2 慢病毒用于疫苗  16-18
二 目的与意义  18-19
三 西尼罗河病毒重组杆状病毒的构建  19-33
  3.1 材料和方法  19-25
    3.1.1 实验材料  19-22
    3.1.2 实验方法  22-25
  3.2 结果  25-30
    3.2.1 质粒pc-prME的构建  25
    3.2.2 转移质粒pFast-G-prME的构建  25-26
    3.2.3 重组Bacmid-G-prME的构建  26-27
    3.2.4 重组Bacmid转染细胞sf9得到重组杆状病毒  27-28
    3.2.5 重组杆状病毒在哺乳动物细胞内介导E基因表达  28-30
  3.3 讨论  30-33
四 西尼罗河病毒重组慢病毒的构建  33-38
  4.1 材料和方法  33-34
    4.1.1 实验材料  33
    4.1.2 实验方法  33-34
  4.2 结果  34-36
    4.2.1 质粒pHR-WNV/prME的构建  34
    4.2.2 假型慢病毒转导后的报告基因检测  34-35
    4.2.3 间接免疫荧光检测WNV/prME基因的表达  35-36
  4.3 讨论  36-38
五 结论  38-39
参考文献  39-46
致谢  46-47
附录  47

相似论文

  1. FGF8在人和小鼠牙齿中亚型分析及其对牙齿发育的影响,Q954.48
  2. 磷酸化介导的UGT1A3代谢活性差异的初步研究,R346
  3. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  4. 利用慢病毒载体制备转基因小鼠和牛胚胎的研究,S814.8
  5. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  6. 靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF1和ORF7 shRNA重组慢病毒的构建与鉴定,S852.65
  7. 鸡传染性法氏囊病毒颗粒疫苗的研制及其免疫效果的研究,S858.31
  8. 慢病毒载体介导的RNAi特异性沉默猪Myostatin基因的研究,S828
  9. 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达体系在sf9细胞中重组表达保守性多巴胺能神经营养因子,R346
  10. MCFP对肝癌细胞生物行为学影响初步研究,R735.7
  11. 家蚕几种尿苷二磷酸—葡萄糖基转移酶的基因表达与功能研究,S881.2
  12. 家蚕一种hAT家族转座酶基因的分析,Q75
  13. 慢病毒载体介导人LIGHT基因对裸鼠大肠癌移植瘤抑制作用的研究,R735.34
  14. p55PIK慢病毒表达载体的构建及鉴定,R373
  15. 抑制Ppif基因的表达减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,R363
  16. 中蜂囊状幼虫病毒辽宁毒株的结构蛋白鉴定及杆状病毒表达载体的构建,S895.1
  17. 蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白受体结合域在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达,Q78
  18. 慢病毒载体介导的针对端粒酶的RNA干扰技术治疗肝癌的体内外研究,R735.7
  19. HBVprec/c shRNA慢病毒真核表达载体的构建及其对HBV增值的影响,R735.7
  20. 慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对大鼠脊髓损伤的修复作用,R651.2
  21. 靶向大鼠血管平滑肌细胞STAT3的慢病毒干扰载体的构建及其效果鉴定的研究,R543

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 家畜病毒学
© 2012 www.xueweilunwen.com