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赤潮毒素的毛细管电泳—酶联免疫分析方法的研究

作　者: 李晓琳
导　师: 张召香
学　校: 青岛科技大学
专　业: 海洋化学
关键词: 毛细管电泳 酶联免疫分析 赤潮毒素 神经性贝毒(NSP) 西加鱼毒素(CFP)
分类号: X55
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本论文研究了利用辣根过氧化物酶（HRP）催化邻氨基酚（OAP）与H2O2的反应,将毛细管电泳与酶联免疫分析相结合,对两种赤潮毒素（神经性贝毒,NSP和西加鱼毒素,CFP）进行了分别研究。在此基础上,通过引入金纳米粒子（AuNPs）作为标记物,实现了对四种贝类毒素（麻痹性贝毒（PSP）、腹泻性贝毒（DSP）、记忆缺失性贝毒（ASP）以及神经性贝毒（NSP））的同时分离和检测。全文共分为七章:第一章,概述了毛细管电泳的基本理论,介绍了酶联免疫分析的研究进展以及赤潮毒素的研究现状。第二章,介绍了电化学检测电极的改进方法以及聚乙烯醇和柠檬酸钠混合制作涂层毛细管的技术,并研究了Pt电极的污染情况。第三章,研究了毛细管电泳HRP—H2O2—OAP酶联免疫分析电化学检测平台的建立,考察了包括运行缓冲溶液浓度和pH值、分离电压、检测电位、进样条件在内的各个实验条件对HRP检测的影响,确定了最佳检测条件。在最佳检测条件下,HRP的线性范围为2.3×10-12-3.5×10-10 mol/L,检测限为1.09×10-12mol/L,质量检测限可以达到zmol水平。第四章,研究了使用HRP—H2O2—OAP体系的毛细管电泳—酶联免疫分析新体系测定NSP的新方法。通过酶标抗原（Ag*）与抗体（Ab）的特异性反应,实现了对Ag*以及Ab-Ag*复合物的检测;在此基础上采用竞争免疫反应模式,实现了对实际扇贝样品中NSP的定性和定量检测。此方法对NSP测定的线性范围为1.0-50.0 ng/mL,检测限为0.1 ng/mL,比常规酶联免疫法（ELISA）低4倍。第五章,研究了基于胶体金放大技术毛细管电泳—酶联免疫分析测定CFP及鱼类样品的新方法。利用AuNPs作为固相载体,将酶（HRP）和抗体（Ab）同时固定在其表面,得到了酶标抗体（Ab*）,增加酶的固定量,提高检测灵敏度。通过抗原（Ag）与Ab*的特异性反应,实现了对Ab*以及Ag-Ab*复合物的检测;在此基础上采用非竞争免疫反应模式,实现了对实际鱼类样品中CFP的定性和定量检测。此方法对CFP测定的线性范围为1.0-50.0 pg/mL,检测限为0.3 pg/mL。第六章,研究了基于纳米金技术的毛细管电泳-酶联免疫同时分离分析四种贝类毒素的新方法,通过引入AuNPs作为标记物,改变了原组分的迁移速率,使得原本无法完全分离的四种贝类毒素能够很好的分离开来;再通过贝类样品中的DSP、PSP、NSP毒素与酶标抗原Ag*竞争有限量的抗体,ASP毒素和相应Ab*反应,实现了对实际样品中四种毒素的检测。结论部分,对全文内容进行了总结。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-13
第一章 前言  13-23
  1 毛细管电泳  13-17
    1.1 毛细管电泳的发展历史  13
    1.2 毛细管电泳的特点  13-14
    1.3 毛细管电泳的分离模式及应用  14
    1.4 毛细管电泳进样技术  14-15
    1.5 毛细管电泳检测技术  15
    1.6 金纳米粒子(AuNPs)在毛细管电泳中的应用  15-16
    1.7 毛细管电泳分析的应用与展望  16-17
  2 毛细管电泳—酶联免疫分析  17-18
    2.1 酶联免疫分析  17
    2.2 毛细管电泳—酶联免疫分析  17-18
    2.3 毛细管电泳—酶联免疫分析的综合应用展望  18
  3 赤潮毒素的研究概况  18-21
    3.1 赤潮毒素的主要类型  18-20
    3.2 赤潮毒素的传统检测方法  20
    3.3 毛细管电泳—酶联免疫分析检测赤潮毒素  20-21
  4 本论文的研究目的和意义  21-23
第二章 电化学检测电极和涂层毛细管的制作及电极污染情况研究  23-33
  1 引言  23-24
  2 实验部分  24-32
    2.1 仪器与试剂  24
    2.2 涂层毛细管的制作  24-26
      2.2.1 涂层毛细管的制作方法  24
      2.2.2 涂层外观  24-25
      2.2.3 自制涂层管使用效果  25-26
    2.3 电化学检测电极的制作  26-28
    2.4 Pt 电极污染情况研究  28-32
      2.4.1 Pt 电极在亚铁氰化钾—铁氰化钾溶液中运行的稳定性  28-29
      2.4.2 Pt 电极在缓冲体系中的污染情况  29-31
      2.4.3 电极污染过程  31-32
  3 小结  32-33
第三章 毛细管电泳HRP—H202—OAP 电化学检测平台的建立  33-42
  1 引言  33-34
  2 实验部分  34-35
    2.1 仪器与试剂  34
    2.2 实验方法  34-35
      2.2.1 实验装置  34-35
      2.2.2 实验过程  35
  3 结果与讨论  35-41
    3.1 AP 的电化学行为  35-36
    3.2 缓冲溶液的影响  36-39
      3.2.1 缓冲液种类的影响  36-37
      3.2.2 缓冲溶液pH 的影响  37-38
      3.2.3 缓冲液浓度的影响  38-39
    3.3 检测电位的影响  39
    3.4 分离电压的影响  39
    3.5 进样条件的影响  39-40
    3.6 AP 的检测  40
    3.7 AP 的重现性、检测限和线性范围  40
    3.8 HRP 标准工作曲线  40-41
  4 小结  41-42
第四章 毛细管电泳-酶联免疫分析神经性贝毒  42-51
  1 引言  42-43
  2 实验部分  43-46
    2.1 仪器与试剂  43
    2.2 实验方法  43-46
      2.2.1 实验装置  43-44
      2.2.2 NSP 实际样品的制备  44-45
      2.2.3 NSP 抗原—抗体复合物的制备及检测过程  45
      2.2.4 NSP 标准品及实际样品的检测过程  45
      2.2.5 酶联免疫吸附(ELISA)法测定NSP  45-46
  3 结果与讨论  46-50
    3.1 缓冲溶液的影响  46
    3.2 检测电位的影响  46
    3.3 进样条件的影响  46
    3.4 分离电压的影响  46
    3.5 NSP 酶标抗原的CE-EC 检测  46-47
    3.6 CE-EC 分离检测 NSP 酶标抗原和抗原-抗体复合物  47-48
    3.7 NSP 检测的线性范围，精密度及检测限  48
    3.8 NSP 实际样品分析  48-50
  4 小结  50-51
第五章 基于胶体金放大技术毛细管电泳-酶联免疫分析西加鱼毒及鱼类样品  51-60
  1 引言  51-52
  2 实验部分  52-54
    2.1 仪器与试剂  52-53
    2.2 实验方法  53-54
      2.2.1 实验装置  53
      2.2.2 CFP 模拟鱼类样品的制备  53
      2.2.3 胶体金酶标CFP 抗体探针的制备  53
      2.2.4 CFP 抗原-抗体复合物的制备及检测过程  53
      2.2.5 CFP 标准品及实际样品的检测过程  53-54
  3 结果与讨论  54-59
    3.1 缓冲溶液的影响  54
    3.2 检测电位的影响  54
    3.3 进样条件的影响  54
    3.4 分离电压的影响  54-55
    3.5 胶体金酶标CFP 抗体探针的CE-EC 检测  55
    3.6 CE-EC 分离检测标准样品中的CFP  55-56
    3.7 CFP 检测的线性范围、精密度及检测限  56-57
    3.8 模拟鱼类样品中CFP 的分析  57-59
  4 小结  59-60
第六章 基于纳米金技术的毛细管电泳-酶联免疫同时分离分析贝类样品中的四种贝类毒素  60-71
  1 引言  60-61
  2 实验部分  61-64
    2.1 仪器与试剂  61
    2.2 实验方法  61-64
      2.2.1 实验装置  61
      2.2.2 纳米金(AuNPs)的制备  61-62
      2.2.3 标准样品制备  62
      2.2.4 实际样品的制备  62-64
      2.2.5 四种贝毒混合实际样品的制备  64
  3 结果与讨论  64-69
    3.1 缓冲溶液的影响  64
    3.2 检测电位的影响  64
    3.3 进样条件的影响  64-65
    3.4 分离电压的影响  65
    3.5 AuNPs 的影响  65-66
    3.6 四种贝毒混合样品的分离  66-67
    3.7 线性范围、精密度及检测限  67-68
    3.8 实际样品分析  68-69
  4 小结  69-71
第五章 结论  71-73
参考文献  73-81
致谢  81-82
附录  82-84

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境污染及其防治 > 海洋污染及其防治
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