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调督通脉法针灸治疗佐剂性关节炎大鼠的实验研究

作　者: 王兴
导　师: 东贵荣
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 针灸推拿学
关键词: 针灸 佐剂性关节炎 核因子kB TNF-α IL-1β
分类号: R245
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


目的：（1）研究核因子kB（NF-kB）在佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜和脊神经节中的表达，从神经-免疫学为切入点探讨类风湿性关节炎（RA）发病的机制。（2）研究NF-kBmRNA和TNF-αmRNA IL-1βmRNA IL-10 mRNA在滑膜中的表达，以探讨类风湿性关节炎（RA）疾病过程中上述多因子的表达水平以及相互之间的关系。（3）研究普通针灸法与调督通脉针灸法治疗AA大鼠的机制及两种方法作用效果比较。方法：以佐剂关节炎（AA）大鼠为研究对象，分为空白对照组、模型对照组、普通针灸组、和调督通脉针灸组。（1）观察关节肿胀度、屈关节疼痛评分和多发性关节炎指数的变化；（2）采用HE染色法观察光镜下AA大鼠膝关节及滑膜与脊神经节病理变化；（3）采用透射电子显微镜观察滑膜的超微结构变化；（4）采用免疫组化法检测滑膜组织和脊神经节中的NF-kB（P65）活性表达水平；（5）采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测滑膜组织的TNF-αmRNA IL-1βmRNA IL-10 mRNA和NF-kBmRNA表达水平。结果：（1）模型组大鼠滑膜TNF-αmRNA、IL-1βmRNA和NF-kBmRNA表达水平明显增高，与空白对照组比较均有显著差异（p＜0.01）；而IL-10 mRNA表达水平降低，与空白对照组比较有显著差异（p＜0.05）。普通针灸组和调督通脉针灸组TNF-αmRNA IL-1βmRNA NF-kBmRNA表达水平与模型组比较均降低，有显著差异（p＜0.05，p＜0.01），而调督通脉针灸组IL-10mRNA表达水平升高，与模型组比较有显著差异（p＜0.05）；调督通脉针灸组TNF-αmRNA IL-1βmRNA NF-kBmRNA表达水平较普通针灸组降低，均有显著差异（p＜0.01），而IL-10 mRNA高于普通针灸组，有显著差异（p＜0.01）；（2）将TNF-αmRNAIL-1βmRNA IL-10 mRNA与NF-kBmRNA表达水平进行相关性分析，结果相关系数分别是0.87、0.92、-0.84，均有显著性差异（p＜0.01）；（3）AA大鼠膝关节滑膜和脊神经节NF-kB（P65）免疫组织化学染色显示NF-kB(P65)阳性反应物染色模型组较正常组明显加深，多呈团块状分布，且胞核内染色较胞浆深。结果模型组较空白对照组明显升高，有显著差异（p＜0.01）；普通针灸组和调督通脉针灸组与模型组比较降低，有显著差异（p＜0.05，p＜0.01）；调督通脉针灸组较普通针灸组降低，有显著差异（p＜0.05）；（4）AA大鼠膝关节滑膜HE染色法观察，模型组滑膜镜下见到：滑膜细胞增生严重，滑膜层明显增厚，为正常组的5.6倍，大量淋巴细胞、单核细胞以及浆细胞侵润，纤维组织增生，小血管增多，血管翳形成；普通针灸组滑膜细胞增生较模型组减轻，厚达3-4层，以单核细胞及淋巴细胞侵润为主，血管翳增生不明显；调督通脉针灸组滑膜轻度增生，无血管翳生成，偶见炎性细胞，镜下状态好于普通针灸组。光镜下病理积分结果显示，模型组与空白对照组比较明显升高，有显著差异（p＜0.01），普通针灸组和调督通脉针灸组病理积分与模型组比较降低，有显著差异（p＜0.01），调督通脉针灸组较普通针灸组降低，有显著差异（p＜0.05）；（5）AA大鼠脊神经节HE染色法观察，模型组脊神经节神经元细胞直径变大，细胞肿胀，细胞间隙增宽，组织疏松；普通针灸组神经元细胞直径略大，细胞轻微肿胀，细胞间隙变窄；调督通脉针灸组神经元细胞直径大小接近正常，细胞排列紧密。（6）透射电子显微镜观察，模型组线粒体病变数，肿胀肥大数，嵴突病变数，变性滑膜细胞数与空白对照组比较明显升高，有显著差异（p＜0.01）；普通针灸组和调督通脉针灸组与模型组比较，上述指标均明显降低，有显著差异（p＜0.01）；调督通脉针灸组较普通针灸组均降低，均有显著差异（p＜0.01）；（7）模型组关节肿胀度、屈关节疼痛评分和多发性关节炎指数与空白对照组比较明显升高，有显著差异（p＜0.05，p＜0.01），普通针灸组和调督通脉针灸组治疗前与模型组比较，上述指标均无显著差异（p＞0.05），而治疗后均明显降低，有显著差异（p＜0.05，p＜0.01），调督通脉针灸组治疗前与普通针灸组比较，上述指标均无显著差异（p＞0.05），而治疗后调督通脉针灸组较普通针灸组均降低，均有显著差异（p＜0.05）。结论：（1）NF-kB在AA大鼠滑膜和脊神经节中表达增强，参与了AA大鼠全身病理变化的发病机制。（2）NF-kB与TNF-αIL-1β在AA大鼠滑膜病变中有正相关关系，存在相互作用，而且与疾病的严重程度相关。（3）普通针灸法和调督通脉针灸法均可改善AA大鼠关节炎足跖肿胀度，多发性关节炎指数及屈关节疼痛数，具有明确的抗炎消肿和镇痛效应，而且调督通脉针灸法明显优于普通针灸法。（4）普通针灸法和调督通脉针灸法均可改善大鼠关节滑膜组织的炎细胞浸润、血管增生和血管翳的形成，以及超微结构的异常，从而减少滑膜组织增生，减轻关节肿胀；而且调督通脉针灸法明显优于常规针灸法。（5）常规针灸法和调督通脉针灸法均可改善AA大鼠脊神经节病理异常，而且调督通脉针灸法明显优于常规针灸法。（6）普通针灸法和调督通脉针灸法均可降低滑膜组织TNF-amRNA、IL-1βmRNA表达和增高IL-10mRNA的表达，均可降低滑膜组织和脊神经节中异常活化的NF-kB活性和异常NF-kBmRNA表达，并且调督通脉针灸法明显优于常规针灸法。这从分子水平、基因转录与调控水平揭示了针灸治疗RA机制。（7）针灸对实验性RA大鼠神经与免疫失调具有明显的调整作用，其中医机理是通过“扶正祛邪”，达到一种“阴平阳秘”的自稳状态以治疗RA。

全文目录


缩略语表  3-4
中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
前言  11-13
文献综述  13-45
  1 祖国医学对类风湿性关节炎的认识  13-24
  2 现代医学对类风湿性关节炎的研究概况  24-37
  3 NF-kB与类风湿性关节炎  37-45
材料与方法  45-55
  1 材料  45-46
  2 实验方法  46-48
  3 观察项目及方法  48-54
  4 统计方法  54-55
实验结果  55-73
讨论  73-91
结论  91-93
致谢  93-94
参考文献  94-106
附图  106-112
个人简介  112-113

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医临床学 > 针灸学、针灸疗法
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