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盐地碱蓬甜菜红素的鉴定及其生物合成的生理机制研究

作　者: 王长泉
导　师: 王宝山
学　校: 山东师范大学
专　业: 植物学
关键词: 盐地碱蓬甜菜红素环境因子 H2O2 Ca2+-CaM系统酪氨酸酶蓝光受体隐花素2
分类号: Q945
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

盐地碱蓬在滨海的潮间带或者部分涝洼积水地带在整个生长期植株地上部分皆为紫红色,而在地势较高或者距离海边较远的地方植株则呈现绿色。作为一种真盐生植物,盐地碱蓬的耐盐机理已得到了比较广泛的研究。但是,盐地碱蓬红色素为哪一类色素?这类色素的特性及生物学意义如何等至今尚未见报道。本课题主要是对盐地碱蓬红色素进行分离鉴定,并对影响红色素合成的主要环境因子以及红色素合成的生理机制进行深入研究。研究结果表明:盐地碱篷红色素溶于水而不溶于纯有机溶剂、在酸性条件下稳定且为红色、在碱性条件下不稳定且为黄色、最大吸收峰为538 nm,根据这些特性我们初步确定该类红色素为甜菜红素（Betacyanins）。盐地碱篷甜菜红素在体外对高温、强光、碱和氧化剂敏感,而在低温、黑暗、酸性环境和没有氧化剂的条件下稳定。盐地碱篷甜菜红素体外清除超氧阴离子自由基的能力不如VC,而清除羟自由基的能力远高于VC。光照抑制盐地碱蓬体内甜菜红素合成,黑暗、低温、高盐环境有利于盐地碱蓬甜菜红素积累,其中萌发期黑暗处理是诱导甜菜红素积累的最重要因子之一。盐地碱蓬种子暗培养3天得到的幼苗是紫红色,光照条件下培养3天得到的幼苗则是绿色。用不同浓度的H₂O₂浇灌盐地碱蓬种子、喷洒5天苗龄盐地碱蓬幼苗的叶片、注射10天苗龄幼苗的叶片,测定其对盐地碱蓬甜菜红素含量的影响。结果显示不同方式的H₂O₂处理对盐地碱蓬不同器官的甜菜红素含量影响明显不同,H₂O₂浇灌后根中的H₂O₂含量增加最大,而叶片中甜菜红素含量增加最明显,但是叶片中的H₂O₂含量和根系中的甜菜红素含量增加却不显著。H₂O₂喷雾和注射虽然能明显提高叶片中的H₂O₂含量,但是对叶片甜菜红素含量却没有显著影响。器官中的H₂O₂含量和甜菜红素含量不成正比,叶片甜菜红素含量主要受到根系H₂O₂含量而不是叶片和茎H₂O₂含量的影响。因此,我们得出结论:H₂O₂浇灌引起的过氧化胁迫信号首先被根系感知,然后根系合成了某种可以传递到叶片并直接诱导甜菜红素合成的物质。培养基中添加不同浓度的Ca²⁺可以促进暗培养条件盐地碱蓬甜菜红素含量,钙螯合剂EGTA、离子通道抑制剂LaCl₃、CaM蛋白抑制剂CPZ和W7都可以抑制黑暗诱导的甜菜红素积累,但是这些处理对光培养条件下甜菜红素含量没有影响。黑暗和光照条件下盐地碱蓬甜菜红素含量都随内源钙的降低而降低。虽然CPZ和W7对光照条件CaM蛋白活性有抑制作用,但对光照条件下甜菜红素含量却没有明显影响。这些研究结果说明外源Ca²⁺及CaM系统只参与了黑暗诱导的甜菜红素合成过程,内源钙同时参与了黑暗和光照条件下盐地碱蓬甜菜红素的合成过程。在盐地碱蓬体内,酪氨酸酶活性只在黑暗条件下培养得到的明显积累甜菜红素的幼苗中检测到,而在光照条件下培养得到的幼苗中则检测不到,黑暗似乎是保持酪氨酸酶活性必需的条件。而且,当黑暗条件下培养得到的紫红色芽苗转入光照条件下后,酪氨酸酶的活性伴随着甜菜红素含量下降而逐渐降低。这说明酪氨酸酶参与了黑暗诱导的盐地碱蓬甜菜红素的合成。光照和黑暗调节盐地碱蓬甜菜红素合成和降解是通过调控酪氨酸酶活性实现的。盐地碱蓬幼苗中CRY2蛋白在黑暗条件下积累,在蓝光条件下降解,这不仅和蓝光条件下甜菜红素含量下降的趋势一致,而且还和甜菜红素合成的关键酶酪氨酸酶的活性降低一致,这说明蓝光条件下CRY2蛋白在甜菜红素的降解过程中起着非常重要的作用,CRY2蛋白的降解是启动这种调控作用的关键。

全文目录

中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
第一部分文献综述  12-27
第二部分实验论文  27-89
  第一章盐地碱蓬红色素的初步鉴定及环境因子对其合成的影响  27-42
    1 材料与方法  27-31
    2 结果与分析  31-39
    3 讨论  39-42
  第二章 H_2O_2 对盐地碱蓬甜菜红素合成的影响  42-52
    1 材料与方法  42-44
    2 结果与分析  44-50
    3 讨论  50-52
  第三章 Ca-CaM 在盐地碱蓬甜菜红素合成过程中的作用  52-62
    1 材料与方法  52-55
    2 结果与分析  55-60
    3 讨论  60-62
  第四章酪氨酸酶在盐地碱蓬甜菜红素合成中的作用  62-75
    1 材料与方法  62-66
    2 结果与分析  66-73
    3 讨论  73-75
  第五章隐花素 2 在蓝光诱导的甜菜红素降解中的作用  75-89
    1 材料与方法  75-79
    2 结果与分析  79-85
    3 讨论  85-89
总结  89-91
参考文献  91-99
致谢  99-100
博士期间发表的主要论文  100

盐地碱蓬甜菜红素的鉴定及其生物合成的生理机制研究

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