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HIV-1 GAG基因片段的体外扩增、克隆和表达及表达产物的纯化和鉴定

作　者: 吉昌华
导　师: 苏成芝
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学
关键词: 人免疫缺陷病毒核心蛋白分子克隆基因表达体外扩增疫苗大肠杆菌质粒原病毒 DHA 基因诊断亚克隆 Western blot
分类号: R346
类　型: 博士论文
年　份: 1991年
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内容摘要

艾滋病(AIDS)是本世纪末肆虐人类的一种严重传染病，已确定其病原为人免疫缺陷病毒(HIV)。对于艾滋病，目前尚无有效的治疗药物，因此，研究HIV疫苗对于AIDS的预防和治疗具有重要意义。HIV-1 gag P17／P18和P24／P25是具有潜力的HIV候选疫苗，英国政府批准进入人体试验的两种艾滋病疫苗，一个是P24-VLP，另一个是P17／P18蛋白上的一段多肽HGP30。本文应用体外扩增技术定向克隆和表达以HPG30序列为中心的一段包括大部分P18和小部分P25的多肽(P20蛋白)，对于研制新的HIV疫苗具有一定的意义。为开展HIV分子生物学研究工作，我们于88年从美国引入一株HIV-1病毒ARV-2的全基因组克隆。为便于工作，本文将ARV-2基因组

全文目录

英文缩写词表  6-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-13
前言  13-15
文献回顾  15-51
  Ⅰ．聚合酶链反应(PCR)及其应用  15-24
  Ⅱ．HIV复制调控研究进展  24-37
  Ⅲ．HIV疫苗研究概况  37-44
  参考文献  44-51
第一部分 HIV-I基因组DNA的亚克隆  51-62
  材料与方法  52-58
    一、实验材料  52-54
    二、实验方法  54-58
  结果  58-60
  讨论  60-61
  参考文献  61-62
第二部分 HIV-I gag基因片段的体外扩增和定向克隆  62-83
  材料与方法  63-70
    一、材料  63-65
    二、方法  65-70
  结果  70-78
    一、P20基因的体外扩增  70-71
    二、P20基因的克隆  71-72
    三、P20基因插入M13 mp18  72
    四、P20基因序列分析  72-78
  讨论  78-81
  参考文献  81-83
第三部分 P20基因在大肠杆菌中的表及其表达产物的纯化和鉴定  83-106
  材料与方法  84-88
    一、材料  84-86
    二、方法  86-88
  结果  88-98
    一、重组表达质粒的构建  88-90
    二、P20基因在大肠杆菌中的表达  90-91
    三、P20蛋白的抗原活性  91-92
    四、P20蛋白的纯化  92-98
  讨论  98-104
  参考文献  104-106
第四部分应用PCR技术直接扩增HIV-1 gag基因序列的实验研究  106-121
  材料与方法  108-110
    一、材料  108
    二、方法  108-110
  结果  110-114
    一、PCR对HIV-1 gag靶基因片段的特异性扩增作用  110-111
    二、PCR方法检测HIV-1基因的敏感性  111
    三、循环次数对PCR产物的影响  111
    四、PCR定量检测HIV-1基因  111-114
  讨论  114-118
  参考文献  118-121
小结  121-122
致谢  122

HIV-1 GAG基因片段的体外扩增、克隆和表达及表达产物的纯化和鉴定

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