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BGH转基因小鼠的建立及其特性与影响因素的研究

作　者: 李宝林
导　师: 苏成芝；殷震；陈苏民；沈孝宙；崔青山
学　校: 第四军医大学
专　业: 生物化学
关键词:
分类号: Q819
类　型: 博士论文
年　份: 1990年
下　载: 58次
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内容摘要


转基因动物是近些年才发展起来的生物高技术，经过科学家们近十年的辛勤努力，无论是在该技术的研究本身，还是在该技术的应用领域都已取得了令人瞩目的成就。迄今，利用该技术所取得的研究成果已充分展示了转基因动物技术在分子生物学、分子遗传学、分子免疫学、肿瘤工程学、医学及畜牧学等研究领域无限广阔的应用前景。因而，正吸引越来越多的优秀科学家投身于该领域研究的行列。 1982年，美国华盛顿大学医学院生物化学系的Palmiter博士通过把大鼠生长激素基因与小鼠金属巯基组氨酸三甲内盐基因启动子体外融合。然后，通过显微注射导入小鼠受精卵而于世界上首次培育成巨大发育型小鼠，即超鼠(Supermouse)。由此，转基因动物潜在的巨大意义引起了整个科学界及产业界的振动，人们纷纷效仿，进行了各种各样的设想和探索，把一系列不同动物来源的生长激素基因分别导入了多种动物种系细胞中，取得了许多宝贵的研究资料。 本研究把小鼠的金属巯基组氨酸三甲内盐基因的启动子与牛生长激素基因组DNA连接，再以紧邻(pSVCATLBGH)和相差2.3kb的离(pSV2LBGH)两种形式与猴空泡病毒(SV40)的增强子融合，还有一种是把免疫球蛋白的启动子和增强子与不含内含子的牛生长激素基因融合(pSLB111)。把上述三种结构的质粒，用西德Leitz显微注射仪，以线状形式，300～1000拷贝，2p1的剂量分别注射

全文目录


缩写及代号表  7-8
摘要  8-11
前言  11-13
第一章 文献综述  13-31
  一.转基因动物的制作及其技术进步  13-17
    (一) 受精卵显微注射  13-14
    (二) 逆转录病毒感染  14-15
    (三) 胚胎干细胞介导  15-16
    (四) 精子载体法  16-17
  二、转基因调节序列的选择  17-19
  三、GH基因及GH转基因鼠的研究  19-21
  四、转基因的整合  21-23
  五、转基因的表达  23-24
  六、转基因动物的遗传规律  24
  七、转基因动物的研究应用  24-31
    (一) 在基因表达与调控研究中的应用  24-25
    (二) 在免疫系统研究中的应用  25
    (三) 在癌基因及肿瘤研究中的应用  25-26
    (四) 在建立研究人类遗传病模型中的应用及基因治疗  26-27
    (五) 在研究病毒诱导疾病中的应用  27-28
    (六) 在改良家养动物品种中的应用  28-29
    (七) 转基因动物生物反应器  29-31
第二章 材料与方法  31-46
  一、实验材料  31-32
    (一) 实验动物  31
    (二) 主要化学试剂、酶类、生物制品、同位素及培养基  31-32
    (三) 外源基因和菌种  32
    (四) 主要仪器及实验条件  32
  二.实验方法  32-46
    (一) 转基因鼠制作方法  32-35
    (二) DNA片段的连接和转化  35-36
    (三) 质粒的限制酶切和片段回收  36-37
    (四) 质粒的提取和纯化  37-38
    (五) 组织DNA提取  38-39
    (六) 组织RNA提取  39-40
    (七) DNA琼脂糖凝胶电泳  40-41
    (八) Southern印迹转移杂交  41-43
    (九) Northern印迹转移杂交  43
    (十) DNA和RNA斑点杂交  43-44
    (十一) CAT活性检测  44
    (十二) BGH基因数和BGH mRNA数测定  44-45
    (十三) ELISA测定转基因鼠血清中BGH  45
    (十四) 血清中胰岛素样生长因子(LGF-I)的测定  45-46
第三章 实验结果  46-67
  一、显微注射用外源基因结构的构建及制备  46-48
    1、pSLB111的构建  46
    2、pSV2LBGH的基因结构  46
    3、pSVCATLBGH的构建  46
    4、pSLB111、pSV2LBGH、pSVCATLBGH的制备  46-48
  二、带pSLB111、pSV2LBGH、pSVCATLBGH等融合基因结构转基因鼠的生产  48-51
  三、BGH基因在鼠染色体内的整合  51-57
    1、点杂交检测F1代转BGH基因鼠  51-52
    2、Southern印迹杂交检测F1代转BGH基因鼠  52-56
    3、Southern印迹杂交检测F2代转BGH基因鼠  56-57
  四、带BGH基因小鼠的快速生长  57-60
  五、BGH基因在鼠体内的表达检测  60-65
    1、BGH基因在肝脏中的表达  60
    2、BGH转基因小鼠血清中生长激素水平的增加  60-61
    3、MTBGH基因的组织特异性表达  61-64
    4、转BGH基因鼠血清中IGF-Ⅰ含量变化  64-65
  六、增强子序列与目的基因的距离对BGH基因转录效率的影响  65-66
  七、调节序列活性的检测  66-67
第四章 讨论  67-84
  一、BGH转基因鼠的成功建立及意义  67-71
  二、关于BGH转基因鼠间生长效应的差异问题  71-72
  三、关于外源基因的整合问题  72-75
  四、内含子对转基因的表达调控之影响  75-76
  五、小鼠体内BGH基因的表达及调控  76-79
  六、关于BGH基因的组织特异性表达问题  79-80
  七、转基因动物的生殖形为与遗传规律  80-81
  八、启示、进一步研究的方向及GH转基因鼠可能的应用  81-84
总结  84-87
参考文献  87-97
英文摘要  97-101

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中图分类: > 生物科学 > 生物工程学（生物技术） > 生物工程应用
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