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食管癌相关基因2（ECRG-2）编码蛋白质的功能研究

作　者: 崔永萍
导　师: 陆士新
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 研究生论文医科大学蛋白质相互作用基因编码协和编码蛋白融合蛋白报告基因共转染结构域
分类号: R735.1
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

ECRG2是我室发现的一个新的食管癌相关基因，其开放阅读框长258bp，编码一个有85个氨基酸的蛋白质。它在正常组织中表达，肿瘤组织中表达下调。本论文从以下几个方面探索ECRG2基因编码蛋白质的功能。第一部分：ECRG2的生物信息学预测利用生物信息学方法分析ECRG2基因编码蛋白质的性质与结构。结果提示ECRG2基因编码一个分子量9.2KD的蛋白质，分别在Pfam和SMART等功能结构域数据库中发现ECRG2基因与Kazal type serine protease inhibitors(KAZAL)结构域高度同源，提示ECRG2基因编码的蛋白质可能属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族。第二部分：ECRG2基因在原核和真核细胞中的表达研究ECRG2基因编码蛋白质在原核和真核细胞中的表达以及丝氨酸蛋白酶抑制剂活性的测定。实验以pGEX-4T-1为表达载体，在大肠杆菌中IPTG诱导GST-ECRG2融合蛋白的表达，并经亲和层析纯化、Western blot鉴定，纯化所得的融合蛋白经测定未显示丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。进一步将ECRG2基因克隆到真核表达载体pcDNA6-V5-His-FLAG中，在Hek293细胞中表达，利用抗体亲和分离纯化FLAG-ECRG2融合蛋白，经测定显示有丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。第三部分：ECRG2基因对食管癌细胞生长及细胞周期的影响。以pcDNA3.1(+)为表达载体，构建真核表达质粒

全文目录

中文摘要  4-9
英文摘要  9-15
实验研究  15-138
  第一部分 ECRG2的生物信息学预测  15-27
  第二部分 ECRG2基因在原核、真核细胞中的表达、纯化及丝氨酸蛋白酶抑制剂活性的测定  27-50
  第三部分 ECRG2基因在真核细胞中的表达及其对细胞生长、细胞周期的影响  50-61
  第四部分酵母双杂交筛选与ECRG2编码蛋白相互作用的蛋白  61-96
  第五部分 ECRG2基因编码蛋白与MT2A蛋白特异相互作用的验证  96-112
  第六部分 ECRG2与MT2A的细胞内定位  112-123
  第七部分 ECRG2与MT2A基因对食管癌细胞增殖及凋亡的影响  123-138
小结  138-139
参考文献  139-144
综述  144-162
已发表论文  162-163
致谢  163

食管癌相关基因2（ECRG-2）编码蛋白质的功能研究

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