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杆状病毒p10基因的结构和功能研究

作　者: 董春升
导　师: 胡志红
学　校: 中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）
专　业: 微生物学
关键词: 杆状病毒纤维结构多角体重组病毒结构形成功能研究纤维状结构功能结构域融合蛋白感染细胞
分类号: Q939.4
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

杆状病毒感染细胞的晚期,在宿主细胞的细胞核或细胞质中会产生特殊的纤维状结构。在AcMNPV感染的细胞中免疫电镜证实这种特殊的纤维结构与病毒编码的一个10kDa的蛋白有关,所以把编码这个蛋白的基因命名为p10。早期的研究发现p10基因不是病毒复制所必需基因, P10蛋白可能在稳定多角体结构、多角体的释放以及核膜裂解中起作用。目前从已经测序的29株杆状病毒中发现21株含有p10同源基因,显示了p10基因在杆状病毒进化过程中的保守性。本论文以HaSNPV和AcMNPV为例对杆状病毒p10基因的结构和功能进行了研究。第一章:文献综述。概括介绍了杆状病毒生物学、分子生物学研究进展和应用研究情况;对杆状病毒的p10基因的研究进展进行了介绍。最后介绍了本论文的目的和意义。第二章:HaSNPV p10基因的克隆、原核表达和抗体制备。将HaSNPV的p10基因编码区克隆至原核表达载体pGEX-KG,获得pKG-p10。经IPTG诱导,P10蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,将表达产物纯化,免疫家兔制备了HaSNPV P10的抗血清,免疫杂交和胶体金实验表明,抗血清可与原核表达的及在昆虫细胞中表达的P10融合蛋白发生特异性免疫反应。第三章: HaSNPV p10基因与纤维结构形成有关功能结构域的鉴定。利用绿色荧光蛋白GFP对HaSNPV P10的蛋白结构域进行了鉴定,将不同长度的p10基因片段和gfp基因N-端相融合,构建了一系列瞬时表达的载体,转染昆虫细胞和哺乳动物细胞后,P10-GFP融合蛋白在转染的细胞里得到了表达。荧光观察和免疫电镜结果显示,HaSNPV P10蛋白N-端的66个氨基酸的七肽重复区(Heptad repeats,HRs)是P10形成纤维结构所必需的,脯氨酸区域和C-端碱性区域对与纤维结构形成所非必需,但对纤维结构的形状有影响。在转染的细胞中P10纤维结构的形成,不需要其他病毒编码的蛋白辅助。第四章:缺失p10基因的HaSNPV重组病毒的分析。利用HaSNPV Bacmid

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第一章文献综述  8-24
第二章 HASNPV P10 基因的克隆、原核表达及抗体制备  24-31
第三章 HASNPV P10 基因与纤维结构形成有关功能结构域的鉴定  31-43
第四章缺失 P10 基因的重组HASNPV 的分析  43-51
第五章 ACMNPV P10 结构域对于P10 纤维结构形成的功能研究  51-65
第六章缺失P10 基因的ACMNPV 重组病毒的构建及其回复拯救  65-75
总结  75-76
参考文献  76-90
已发表和撰写的论文  90-91
致谢  91-92

杆状病毒p10基因的结构和功能研究

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