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应用酵母双杂交体系筛选人精子膜蛋白YWK-Ⅱ蛋白胞外区的作用配体

作　者: 张树民
导　师: 缪时英；王琳芳；张梅林
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生物化学
关键词: 博士学位论文医科大学受精素胞外区酵母双杂交体系结构域协和精卵相互作用精子细胞顶体反应
分类号: Q51-3
类　型: 博士论文
年　份: 1999年
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内容摘要

精子膜蛋白在精子发生和精卵相互作用过程中起着重要的作用。YWK-Ⅱ蛋白是本实验室筛选出的一种具有单一跨膜结构的精子膜蛋白，其cDNA开放阅读框架(ORF)为2289bp，编码763个氨基酸。已知它的胞外区具有明显的抗生育作用，而胞内区能与G_o蛋白特异结合。据此推测，YWK-Ⅱ蛋白有可能作为精子细胞表面G蛋白偶联受体参与调节人类的生育活动。因此，寻找YWK-Ⅱ蛋白胞外区的作用配体，不仅有利于我们揭示其抗生育作用的机制，而且还可能为精子发生和／或受精的研究提供新的线索。我们选择了YWK-Ⅱ蛋白胞外近膜端226个AA(与APP同源性较低区段)作为“诱饵”蛋白，利用酵母双杂交系统从睾丸文库和卵巢文库中筛选能与YWK-Ⅱ蛋白胞外段相互作用的配体。结果发现睾丸组织中的human diaphanous protein 1(HDIA1)以及卵巢组织中的穆勒氏抑制物(Mullerian inhibiting substance，MIS)和human HLA-B associated transcripts 3(BAT3)可能是与YWK-Ⅱ蛋白胞外区结合的配体。此外，我们还发现，“诱饵”蛋白中段的63个AA是YWK-Ⅱ蛋白胞外区与上述配体相互作用的活性部位，它与三种配体之间的作用要远远强于整段“诱饵”蛋白(226AA)。而此63AA羧基端的35个AA却不能在体内与HDIA1结合。35AA与BAT3和MIS的相互作用强于整段”诱饵”蛋白(226AA)，但弱于63AA。 HDIA1是Rho分子(小G蛋白家族成员之一)的作用靶蛋白，已知其对精原和精子细胞的形态改变，粘附发生及胞质分裂等功能活动有影响。而MIS是睾丸Sertoli细胞和卵巢的卵丘颗粒细胞分泌的一种140Kd同源二聚体糖蛋白。除了在男(雄)性的性别发育中起着关键性的作用以外，MIS对精子的运动能力及存活率都有正性影响

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
前言  10-15
实验材料与方法  15-31
实验结果  31-73
讨论  73-82
小结  82-84
参考文献  84-90
综述  90-111
附录  111-124
致谢  124

应用酵母双杂交体系筛选人精子膜蛋白YWK-Ⅱ蛋白胞外区的作用配体

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