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阵发性睡眠性血红蛋白尿症造血干/祖细胞体外单个细胞培养研究及基质研究初探

作　者: 韩冰
导　师: 武永吉
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 内科学
关键词: 祖细胞 正常人血清 造血干细胞 细胞扩增 单个细胞 表型 全血细胞减少 医科大学 人外周血 骨髓基质细胞
分类号: R55
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要


阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得的溶血性疾病。临床上以血管内溶血、严重贫血及血栓为主要特征。临床上还观察到PNH与再生障碍性贫血(AA)有密切的关系。人们已经认识到，PNH造血干细胞发生PIG-A基因突变导致GPI锚合成障碍，致使GPI锚连蛋白(如CD59、CD55等)缺乏，可引起溶血及其它临床表现。但是，有关PNH的发病机制，迄今仍有许多问题有待解决。如缺乏GPI锚连蛋白的异常表型细胞往往能与正常表型的克隆长期共存并占据造血优势，这种优势是由于突变细胞本身具有增殖优势，还是由于病人本身的所谓“正常”克隆存在增殖生存缺陷而导致的相对优势?病人的正常表型细胞生长是否正常，能否在自体造血干细移植时重建正常造血?病人的造血异常有无造血干细胞以外的其它因素?本文针对这些问题从不同角度进行了研究，其结果将有助于阐明PNH的发病机制。 一、应用流式细胞仪测定了21例病人外周血及骨髓造血干／祖细胞(以CD34+为标志)锚连蛋白CD59的表达，并将病人干／祖细胞的总数与正常人进行比较，结果发现：1)病人骨髓及外周血CD34+细胞总量均明显低于正常人(P＜0.001)，但在疾病缓解时总量与正常对照无显著性差异(P＞0.05)。2)病人外周血CD34+细胞主要以CD59+表型为主(CD34+CD59+细胞占总CD34+细胞的81.4±16.1％)，即使是临床未缓解或骨髓中CD34+细胞以CD59-表达为主的病人，他们外周血的CD34+细胞仍以CD59+表型为主。3)病人骨髓中CD34+细胞在近期有溶血发作时主要以CD59-表型为主(CD59-细胞占77.2±5.2％)，而在临床缓解时主要以CD59+表型为主(CD59+细胞占77.0±15.1％)。 二、为了避免由于分选时混入的非造血细胞可能对病人干／祖细胞产生的影响，排除干／祖细胞之间的相互作用，并动态地全面地了解单个造血干／祖细胞本身的生长情况，进行了单个细胞培养：首先用免疫磁珠富集CD34+细胞，再用流式细胞仪自动分选系统分别将病人CD34+CD59+和CD34+CD59-干／祖细胞单个分选入96孔培养板，进行单个细胞培养，观察不同细胞各个生长指标，并与正常对照比较，来判断CD59-细胞是否具有高生长能力。 1 PNH病人正常与异常表型干／祖细胞生长的差异 1)在单个细胞培养条件下，CD34+CD59-细胞(异常表型细胞)在细胞发生分裂(细胞数≥2个)的比率、形成集落(细胞数≥50)的比率及扩增的总数(所有细胞发生分裂的孔的细胞数的总和)上都超过了CD34+CD59+细胞(正常表型细胞)(P＜0.05)，但在较大集落(细胞数≥500及≥1000)形成比率、单个细胞扩增的数目(细胞扩增总数／发生分裂孔的数目)上与正常表型细胞没有显著差别。在单个细胞次级集落的形成能力上，异常与正常表型细胞也无显著差别。以上结果说明异常表型细胞较正常表型细胞在细胞增殖、形成集落的数目及最终扩增的总数上有一定优势，但在较大的集落的形成，平均单个集落的大小及较为原始的干／祖细胞的生长能力上与正常表型细胞相似。3)无论正常或异常表型的细胞，进行单个细胞培养与将同等数目的细胞进行群体培养，细胞扩增的总数有显著差别(P＜0.05)，群体培养具有更强的扩增能力。 2 PNH病人异常表型干／祖细胞与正常对照生长的差异 1)在单个干／祖细胞培养条件下，PNH CD34+CD59-细胞在细胞分裂、形成集落比例、及较大集落比例上同正常人CD34+细胞接近(P＞0.05)，但单个细胞扩增的数目及细胞扩增

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
第一部分 阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血及骨髓正常及异常造血干／祖细胞组成分析  12-21
第二部分 阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常及异常造血干／祖细胞体外单个细胞培养比较研究  21-41
  第一节  22-33
  第二节  33-41
第三部分 阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血清对正常人及病人骨髓造血干／祖细胞生长影响的体外单个细胞培养研究  41-51
  第一节  41-45
  第二节  45-51
第四部分 阵发性睡眠性血红蛋白尿症基质研究初探  51-59
结论  59-60
参考文献  60-63
主要仪器设备及试剂  63-65
缩略词  65-66
综述一 阵发性睡眠性血红蛋白尿症的研究进展  66-75
综述二 骨髓基质细胞  75-81
博士生期间发表的学术论文及综述  81-82
致谢  82-83

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 血液及淋巴系疾病
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