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人特异精子膜蛋白hSMP-1基因结构研究

作　者: 王航
导　师: 王琳芳；缪时英；张梅林
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生物化学
关键词: 医科大学剪接点结果与分析精子发生协和外显子内含子人基因组蛋白聚糖剪接机制
分类号: Q344
类　型: 博士论文
年　份: 1997年
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内容摘要

抗精子抗体的存在可能是引起患者不明原因不育的原因之一。在我们以前的研究中，曾对300例不明原因不育患者及204例正常人进行了免疫印迹分析(immunoblot)，发现不育者血清中抗精子抗体的阳性率达44.7％，正常组仅为5％左右。运用不育病人含高滴度抗精子膜蛋白抗体血清对人睾丸λ gt11表达型cDNA文库进行了筛选，获得了一个1.7kb cDNA片段，命名为HSD-1，其编码蛋白为hSMP-1。但是，HSD-1的开放阅读框架及3′非编码区均不完整。将转录质粒载体pGEM-2Z与HSD-1重组制备反义链RNA(antisense RNA)，利用原位杂交技术对HSD-1在睾丸中转录情况进行了研究。结果显示，在精子发生各阶段包括：精原细胞、精母细胞及精细胞中均有HSD-1转录水平表达。进而应用pRSET-B载体，在T7启动子调控下，HSD-1在E.coli原核细胞中获得高效表达。免疫荧光分析显示：表达产物hSMP-1定位在人精子头部顶体区。为了获得编码hSMP-1全长cDNA核苷酸顺序，以HSD-1全长1.7kb及HSD-1 5′端800bp为探针分别在人睾丸λ gt11表达型cDNA文库重新筛选和在人睾丸λ gt10 5′-stretch cDNA文库进行筛选，获得10个阳性克隆。获得了hSMP-1全长cDNA。在对上述10个阳性克隆中的5个克隆进行核苷酸序列测定及分析中发现，与HSD-1相比存在一些变异。变异类型主要为：核苷酸序列插入、缺失及5′末端变异等。提示编码hSMP-1的cDNA是非常复杂的，在精子发生中会发生变化，可能是由mRNA变位剪接引起。本文工作，对上述以HSD-1为探针从人睾丸cDNA文库中筛到10个阳性克隆的其余5个克隆进行了核苷酸序列测定及分析。与HSD-1相比，也发现了一些变异情况。包括核苷酸序列缺失、5′端变异等。在本文研究中，以1.7kb HSD-1为探针，对人16种组织：心、脑、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾、胰腺；脾、胸腺、前列腺、睾丸、卵

全文目录

综述：变位剪接与精子发生  4-34
中文摘要  34-37
英文摘要  37-40
前言  40-43
材料和方法  43-75
实验结果与分析  75-113
讨论  113-123
小结  123-125
附录  125-132
参考文献  132-138
致谢  138-139

人特异精子膜蛋白hSMP-1基因结构研究

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