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神经干细胞培养、增殖、迁移和分化的研究

作　者: 段发亮
导　师: 马廉亭
学　校: 第一军医大学
专　业: 神经外科学
关键词: 神经干细胞纹状体培养表皮生长因子碱性成纤维生长因子增殖多聚赖氨酸贴壁生长分化迁移
分类号: R741
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

第一部分神经干细胞培养、分化和鉴定目的探讨体外分离培养大鼠纹状体神经干细胞的培养方法以及神经干细胞的鉴定。方法选用第一军医大学实验动物中心提供的普通级健康成年Sprague-dawley(SD)大鼠,合笼怀孕后取孕13-14天大鼠胚胎的纹状体,制成单细胞悬液,显微镜下细胞计数,以1×10~4/cm~2接种到24孔培养板上,分为对照组和实验组,对照组加入DMEM-F12,实验组除基本细胞培养液外同时加入20ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)。结果倒置显微镜下每天观察神经干细胞的生长状况,可见实验组培养24h后大量活细胞均匀分布,大量成纤维细胞沉于培养瓶底,部分细胞悬浮于培养液中,细胞成对出现者较多,并可见细胞分裂相;72小时后出现许多4-6个细胞聚集形成的细胞团;5天后出现许多大小不等的细胞集落,每个集落由数十个或数百个细胞组成,即神经球。神经球呈悬浮生长,细胞排列紧密,部分细胞球由于营养缺乏中间可见坏死。对照组无细胞增殖生长。将实验组中漂浮的细胞球制成单细胞悬液后自然沉降分化,免疫组化结果提示培养的细胞球Nestin染色阳性,分化3天后部分细胞为神经细胞、部分细胞为星形胶质细胞。结论我们培养的细胞球能够自我增殖并分化为神经细胞和星形胶质细胞,是神经干细胞,再将培养的漂浮神经干细胞球制成单细胞悬液用于其它实验研究。

全文目录

摘要  3-7
ABSTRACT  7-13
前言  13-15
第一部分神经干细胞培养、分化和鉴定  15-24
  1.1 材料与方法  15-18
  1.2 结果  18-19
  1.3 讨论  19-21
  1.4 结论  21-22
  附图  22-23
  参考文献  23-24
第二部分 EGF、bFGF对神经干细胞增殖的研究  24-30
  1.1 材料与方法  24
  1.2 结果  24-25
  1.3 讨论  25-26
  1.4 结论  26-27
  附图表  27-29
  参考文献  29-30
第三部分多聚赖氨酸对神经干细胞增殖和分化的研究  30-36
  1.1 材料与方法  30
  1.2 结果  30-31
  1.3 讨论  31-32
  1.4 结论  32-33
  附图表  33-35
  参考文献  35-36
第四部分神经干细胞球迁移探讨  36-44
  1.1 材料与方法  36
  1.2 结果  36-37
  1.3 讨论  37-40
  1.4 结论  40-41
  附图  41-43
  参考文献  43-44
综述  44-52
附录  52-53
成果  53-54
致谢  54-55

神经干细胞培养、增殖、迁移和分化的研究

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