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基于mtLSU rRNA和ITS1-5.8SrRNA-ITS2基因序列的肺孢子虫分子系统发育学研究

作　者: 张帆
导　师: 卢思奇
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 病原生物学
关键词: 肺孢子虫分子系统发育内转录间隔区 5.8S核糖体RNA基因线粒体核糖体大亚基RNA基因
分类号: R384
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

目的:以mt LSU rRNA和ITS1-5.8SrRNA-ITS2两种基因为分子标记,构建系统发育树,探讨肺孢子虫与宿主的进化关系以及属的分类地位。方法:采用按动物实际体重定量皮下注射地塞米松法诱导实验动物(SD大鼠、ICR小鼠、长爪沙鼠、新西兰白兔、C57BL/6N小鼠和豚鼠)感染肺孢子虫。收集实验动物肺泡灌洗液、肺组织、临床疑似病例痰液样本。提取肺孢子虫总DNA。设计合成扩增2个目的基因PCR引物,检验其特异性和敏感性。扩增目的基因,产物直接或克隆测序,分析比较序列的同源性和进化距离。结合GenBank中相关基因序列构建分子系统发育树。结果:从建立的PCP动物模型及临床病例样本获得了肺孢子虫DNA。获得了4种宿主该虫mt LSU rRNA基因5个序列,其中人1和长爪沙鼠肺孢子虫的该基因序列未见报道。获得4种宿主该虫的ITS1-5.8SrRNA-ITS2基因4个序列,其中长爪沙鼠和新西兰白兔肺孢子虫的该基因序列未见报道。构建了肺孢子虫系统发育树。结论:按动物实际体重定量皮下注射地塞米松方法建立了低死亡率PCP动物模型。PCR检测mt LSU rRNA基因法对PCP检测可行。肺孢子虫具有遗传多样性和宿主特异性,与其宿主之间呈协同进化关系。长爪沙鼠和新西兰白兔肺孢子虫可能是该属中独立的“种”。肺孢子虫属归属于真菌界的子囊菌门。

全文目录

一、中文摘要  4-5
二、英文摘要  5-7
三、引言  7-17
四、正文  17-73
  (一) 材料与方法  17-36
    1.实验材料  17-19
    2.实验方法  19-36
      ① PCP动物的建立  19-21
      ② 病人痰液样本收集  21-22
      ③ 目的基因的扩增、测序及初步分析  22-32
      ④ 肺孢子虫分子系统发育分析  32-36
  (二) 结果  36-68
    1.按动物实际体重定量注射法建立PCP动物模型结果  36-42
    2.基因扩增、测序及分析结果  42-59
    3.肺孢子虫分子系统发育分析  59-68
  (三) 讨论  68-73
    1.PCP动物感染模型的建立  68-69
    2.基因序列的扩增及测序  69-70
    3.肺孢子虫分子系统发育分析  70-71
    4.分子系统发育树的构建  71-73
五、结论  73-74
六、参考文献  74-82
七、附录  82-93
八、在学期间发表的论文  93-94
  卡氏肺孢子虫低死亡率SD大鼠动物模型的建立  93-94
致谢  94

基于mtLSU rRNA和ITS1-5.8SrRNA-ITS2基因序列的肺孢子虫分子系统发育学研究

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