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魟鱼软骨多糖的研究

作　者: 朱丹
导　师: 袁昌鲁
学　校: 辽宁中医学院
专　业: 生药学
关键词: 半乳糖硫酸软骨素多糖葡萄糖醛酸含量测定方法含量测定法活性碳吸附回收率试验无水乙醇注射剂
分类号: R284
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本文共分三个部分，第一部分探讨了（鱼工）鱼软骨多糖的分离纯化及化学结构的分析；第二部分对（鱼工）鱼软骨多糖及其注射液进行研究；第三部分对（鱼工）鱼软骨多糖的药效学进行研究。 1 （鱼工）鱼软骨多糖的分离、纯化和结构研究通过碱提、超滤、丙酮分级沉淀、脱蛋白、Sephadex G-75凝胶柱层析，首次从（鱼工）鱼软骨中得到二个单一糖胺聚糖RCG Ⅰ和RCG Ⅱ。经¹³C—NMR、GC、GC—MS、IR、HPLC分析表明，RCG Ⅰ和RCG Ⅱ为由β-D-1，4连接胺基半乳糖、β-D-1，4连接的葡萄糖醛-酸、β-D-1，4连接半乳糖、β-D-1，4连接的葡萄糖构成。通过含量测定可知胺基半乳糖、葡萄糖醛酸的含量均分别为32％和33％左右，为主要构成单糖，二者摩尔比为1∶1。硫酸基团取代在1，4连接胺基半乳糖、1，4连接半乳糖、1，4连接葡萄糖的6位，硫酸基团的含量为18.0％。另外该多糖中的胺基半乳糖的胺基上尚含有乙酰基团。该糖中半乳糖和葡萄糖的含量较小，RCG Ⅰ葡萄糖与半乳糖的摩尔比为1∶2.5，RCGⅡ为1∶5。RCG Ⅰ和RCGⅡ的分子量分别为9.7×10⁴和1.8×10⁵。以上分析说明RCG Ⅰ和RCGⅡ的主要结构基本一致，仅在与蛋白质桥连的末端糖链结构有细微差别。该糖为硫酸软骨素类多糖。通过对RCG Ⅰ和RCGⅡ进行活性检测，均具有抑制内皮细胞增殖的作用，可以肯定为（鱼工）鱼软骨的活性成分之一。 2 （鱼工）鱼软骨多糖及其注射剂的制备工艺及质量标准对（鱼工）鱼软骨多糖及其注射液的提取工艺、酶解工艺进行了考察，利用正交试验选取最佳提取酶解条件，最后确定采用稀碱提取法：以4％的氢氧化钠为溶剂，于室温下搅拌提取，第一次5倍量提取9小时，第二次3倍量提取9小时；提取液除酸性蛋白后，按比例加入胰酶，于50℃左右保温酶解2小时；盐解15分钟，活性白陶土、活性碳吸附：95％乙醇醇沉；无水乙醇、丙酮脱水，干燥。用该品以注射用水溶解，加入氯化钠调等渗，过滤，分装，灭菌，制成注射液。对（鱼工）鱼软骨多糖制剂及其注射剂建立了一般检查标准及含量测定方法，通过测定葡萄糖醛酸的含量来控制（鱼工）鱼软骨多糖的含量；并对含量测定方法进行了方法学考察，精密度、重复性、稳定性、加样回收率试验表明，该法符合含量测定法的要求。摘要 3红鱼软骨多糖的抗肿瘤及降血脂研究药效学实验表明姐鱼软骨多糖具有明显的抗肿瘤作用，同时具有增强荷瘤小鼠的免疫力作用。可抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的生长。体外实验表明献鱼软骨多糖可抑制胶原酶对胶原蛋白的水解;抑制内皮细胞的增殖。降脂实验表明肛鱼软骨多糖具有良好的降血脂作用。

全文目录

中英文名词术语对照  5-6
英文摘要  6-8
中文摘要  8-10
前言  10-13
第一部分  13-49
  第一章魟鱼软骨多糖结构的研究  13-49
    第一节魟鱼软骨多糖的提取、分离与纯化  13-20
      1 仪器与试剂  14
      2 提取、分离与纯化  14-15
      3 总糖含量测定  15-16
      4 蛋白含量测定  16-17
      5 乙酸纤维素膜电泳  17-19
      6 结果与讨论  19-20
    第二节魟鱼软骨多糖活性部位的检测  20-23
      1 仪器  20
      2 胶原酶抑制实验  20-21
      3 内皮细胞增殖抑制实验  21-23
    第三节魟鱼软骨多糖RCGⅠ结构分析  23-35
      1 仪器与试剂  24
      2 纯度及分子量测定  24-26
      3 单糖组成分析  26-28
      4 部分酸水解  28
      5 甲基化分析  28-30
      6 ~(13)C-NMR分析  30-31
      7 IR分析  31-32
      8 结论  32
      9 讨论  32-35
    第四节魟鱼软骨多糖RCGⅡ结构分析  35-43
      1 仪器与试剂  35
      2 纯度及分子量测定  35-36
      3 单糖组成分析  36-38
      4 部分酸水解  38-39
      5 甲基化分析  39-41
      6 ~(13)C-NMR分析  41
      7 IR分析  41-42
      8 结论  42
      9 讨论  42-43
    第五节魟鱼软骨多糖成分的含量及鉴别测定  43-49
      1 仪器与试剂  43
      2 氨基己糖含量测定及其鉴别测定  43-44
      3 己糖醛酸的含量测定及鉴别测定  44-46
      4 硫酸基含量测定  46-47
      5 硫酸基／羧酸基比值测定  47-49
第二部分  49-78
  第二章缸鱼软骨多糖制备工艺的研究  49-74
    第一节提取溶剂的考察  49-53
      1 仪器与试剂  49
      2 前处理  49-50
      3 三种提取方法的工艺流程  50-51
      4 结果  51
      5 讨论  51-53
    第二节稀碱法提取条件的考察  53-55
      1 仪器与试剂  53
      2 提取条件正交试验设计  53-54
      3 结果  54-55
      4 讨论  55
    第三节魟鱼软骨多糖制备酶解工艺的考察  55-57
      1 酶解正交试验设计  55-56
      2 正交试验结果  56-57
      3 讨论  57
    第四节魟鱼软骨多糖制备盐解工艺考察  57-59
      1 盐解温度的考察  57-58
      2 盐解时间的考察  58-59
      3 讨论  59
    第五节魟鱼软骨多糖制备双吸附工艺考察  59-61
      1 活性炭处理方法的最佳方法考察  59-60
      2 活性炭用量的考察  60-61
      3 双吸附温度的考察  61
      4 讨论  61
    第六节魟鱼软骨多糖醇沉工艺的考察  61-62
      1 影响醇沉效果的因素  61-62
      2 结果  62
      3 讨论  62
    第七节最佳制备工艺的确定  62-64
      1 最佳制备工艺的确定  62-63
      2 工艺说明  63-64
    第八节魟鱼软骨多糖的质量标准  64-69
      1 一般检查  64-65
      2 分子量与分子量分布  65-66
      3 含量测定  66-69
    第九节糖醛酸含量测定方法学考察  69-74
      1 仪器与试剂  69
      2 测定条件的考察  69-71
      3 方法学考察  71-74
  第三章魟鱼软骨多糖注射液的研究  74-78
    第一节魟鱼软骨多糖注射液制备工艺  74-76
    第二节魟鱼软骨多糖注射液质量标准  76-78
第三部分  78-92
  第四章魟鱼软骨多糖的药效学研究  78-91
    第一节魟鱼软骨多糖抗肿瘤作用的研究  78-81
    第二节魟鱼软骨多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响  81-85
    第三节魟鱼软骨多糖对鸡胚绒毛尿囊膜血管形成的影响  85-87
    第四节魟鱼软骨多糖对高血脂大鼠的影响  87-91
  第五章结论  91-92
附图  92-102
参考文献  102-107
致谢  107-108
综述  108-123
个人简历  123

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