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日本血吸虫新疫苗分子筛选鉴定及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节

作　者: 陈欲晓
导　师: 易新元；曾宪芳
学　校: 中南大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫雄虫细胞因子核酸疫苗
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

本研究着重于对日本血吸虫(Sj)雄虫源性抗原候选疫苗分子的筛选鉴定和保护性免疫的研究，以及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节研究二大部分。为获得Sj雄虫特异性抗原疫苗候选分子，开展了Sj雄虫天然组分抗原的分离鉴定及保护性免疫研究。采用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)比较分析Sj雄性、Sj雌性的抗原组分，Western blot检测组分蛋白的抗原性和性别特异性，动物实验评估抗原的免疫保护效果。结果发现Sj雄虫可溶性抗原含一高丰度带，为44.6kDa，Sj雌虫可溶性抗原中未见类似带。通过SDS-PAG胶切法，获高纯度44.6kDa蛋白。Western blot检测44.6kDa蛋白具抗原性和雄虫特异性，并诱导小鼠产生39.31％的减虫率和41.98％的减卵率，与对照组比差异有显著性(p＜0.001)。有关其抗雄虫特异性免疫值得今后研究。为寻找雄虫抗原表位模拟肽分子，从表位分子水平构建Sj新型疫苗，作者进行了Sj雄虫抗原表位模拟肽的筛选及其保护性免疫研究。用抗Sj雄虫抗原的IgG筛选噬菌体随机肽库，获得多个阳性噬菌体克隆，Dot-ELISA鉴定其具有抗原性。用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠获31.72％的减虫率和51.54％的减卵率，与对照组比差异有显著性(p＜0.001)，表现为抗Sj感染和抗生殖作用。为发现雄虫特异性的基因及其编码的靶抗原分子，从基因水平揭示V性别特异性差异，采用U雄虫免疫血清筛选对成虫CDNA文库，对部分阳性克隆的插入片段进行 PCR鉴定及测序。结果获得 11个阳性克隆，通过互联网进行核着酸序列同源性分析，发现三个新基因，百分M、Cps和＃ps（GenBan 注册号分别为AF519808、AF524896和 AF517843入它们的预测编码蛋白可能为存在于胞浆和胞核内的信息传递分子，三个新基因是否为雄虫性别特异性值得进一步探讨。对SfMA进行了亚克隆及原核表达，并用表达产物免疫小鼠。结果获得SJ－MA原核表达的重组体，并在ECOli中高效表达。SDS－PAGE和Western blot显示融合蛋白为54．skDa具良好的抗原性。融合蛋白与FCA混合免疫小鼠可诱导高滴度的特异性格G抗体，免疫组的减虫率及减卵率分别为34．29％与48．76凡与对照组比差异有显著性（／0．001人表明新基因 SfMA表达蛋白能诱导小鼠抗 SJ的保护性免疫，提示其作为U疫苗候选分子的潜在价值。为研究细胞因子DNA对核酸疫苗免疫的调节，作者分别构建了小鼠 IFN个和小鼠几对真核表达重组质粒，并首次分别联合 SJ组织蛋白酶B DNA疫苗免疫小鼠，通过免疫酶组织化学技术观察两种质粒DNA在小鼠肌肉细胞的表达，通过减虫率减卵率评估免疫保护性作用。结果两种细胞因子质粒和 DNA疫苗在小鼠肌肉细胞分别同时表达，其中 IFN一下白显著增强 DM疫苗的减虫率（27．37％，P＜0，05），而几一4能显著增强＊A疫苗的减虫率不减卵率（43．200和 76．63O，／0，01）。为研究 Th型和 ThZ型应答优势分别对 DNA疫苗免疫的调节奠定基石出。

全文目录

前言  13-15
第一章日本血吸虫雄虫天然组分抗原的分离鉴定及保护性免疫的研究  15-25
  1 、日本血吸虫雄虫天然组分抗原的分离与鉴定  15-20
  2 、日本血吸虫雄虫44.6kDa天然组分抗原的免疫保护效果的研究  20-25
第二章日本血吸虫雄虫抗原表位的模拟肽分子的筛选及免疫保护效果的研究  25-31
第三章日本血吸虫新基因的克隆、表达和免疫保护效果的研究  31-51
  1 、日本血吸虫雄虫抗原免疫血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库  31-43
  2 、新基因Sj-MA的克隆、表达及免疫保护效果的研究  43-51
第四章细胞因子佐剂增强核酸疫苗效果的初步研究  51-62
第五章 Th2应答优势调节核酸疫苗免疫初步研究  62-70
参考文献  70-79
致谢  79-80
综述  80-90
攻读学位期间发表论文及所获奖项  90

日本血吸虫新疫苗分子筛选鉴定及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节

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