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哮喘致敏血清和细胞因子引起的气道平滑肌细胞FKBP12.6表达下调及其与应激时钙释放的关系

作　者: 赵建红
导　师: 叶红
学　校: 华中科技大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 哮喘 FKBP12.6 RyR2 气道平滑肌细胞细胞因子肌浆网钙
分类号: R562.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

FKBP12.6是免疫抑制素FKBPs家族中的一种,分子量是12.6kDa。Ryanodine受体(RyR)是一种肌浆网膜上的钙离子释放通道,有3个亚型,RyR1, RyR2,RyR3,其中RyR2主要存在于心肌和气道平滑肌中,在肌浆网钙释放中起主要作用。FKBP12.6能选择性的结合在RyR2上,可维持RyR2功能稳定。已有研究发现心肌中FKBP12.6与RyR2结合稳定,能降低肌浆网钙离子释放,从而成为治疗心衰的靶点。在气道平滑肌中,FKBP12.6是否有相同的作用,FKBP12.6与RyR2结合或解离是否与气道平滑肌细胞中钙离子的释放相关?我们推测,气道平滑肌细胞中FKBP12.6表达变化与肌浆网的释放钙有关。目的研究FKBP12.6的表达变化对哮喘气道平滑肌细胞肌浆网释放钙的影响。方法1.用Real time RT-PCR和western blot分别检测用哮喘致敏血清或细胞因子IL-5,IL-13,TNF-α处理18-22小时后大鼠支气管平滑肌细胞FKBP12.6 mRNA和蛋白表达。2.用免疫荧光和免疫共沉淀技术分别检测用哮喘致敏血清和细胞因子处理后大鼠支气管平滑肌细胞FKBP12.6和RyR2的共定位和结合活性变化。3.分别用FKBP12.6干扰RNA和FKBP12.6过表达载体转染大鼠气道平滑肌细胞72-96小时,利用钙离子成像系统检测激动剂bradykinin(10-5 mol/L)对胞浆内钙离子浓度的影响。结果1.分别用哮喘致敏血清或细胞因子处理后FKBP12.6 mRNA和FKBP12.6蛋白与对照组相比,均明显降低(P<0.05);2.哮喘致敏血清处理后大鼠气道平滑肌细胞与RyR2结合的FKBP12.6的量与对照组相比有明显减少。3.免疫荧光发现哮喘致敏血清处理或细胞因子处理后FKBP12.6与RyR2共定位显著减少。4. FKBP12.6干扰RNA病毒载体转染后,10-5 mol/L bradykinin刺激后胞浆内钙升高后回到基线的的时间明显延长,为对照的两倍;FKBP12.6过表达病毒载体转染细胞后,在激动剂下胞浆内钙升高的幅度明显比对照低,回到基线的时间是对照的1/3。结论结果表明哮喘致敏血清或细胞因子IL-5,IL-13,TNF-α处理大鼠气道平滑肌细胞使细胞中FKBP12.6表达降低,导致与结合的FKBP12.6减少,使RyR2的钙释放通道更容易开放,可能与哮喘炎症导致气道平滑肌的收缩反应性增强有关。增加FKBP12.6表达可稳定RyR2通道,增加RyR2通道上FKBP12.6的结合数量,从而可以降低肌浆网中钙的释放。

全文目录

主要缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
材料与方法  11-21
结果  21-32
讨论  32-34
参考文献  34-36
综述  36-43
  参考文献  39-43
致谢  43

哮喘致敏血清和细胞因子引起的气道平滑肌细胞FKBP12.6表达下调及其与应激时钙释放的关系

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