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丹参酮保护海水淹溺性肺损伤的机制研究

作　者: 张勇
导　师: 金发光；张博
学　校: 第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: 海水肺损伤丹参酮巨噬细胞迁移抑制因子 phospho-NF-κB p65 IL-6 TNF-α
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景:丹参是唇形科植物,其根茎经人工干燥后可制成传统中药材,广泛应用于各种心脑血管疾病的临床治疗。目前已在丹参中检验出多种水溶性或脂溶性化合物,这些活性成分不但具有扩张冠状动脉、改善心肌供血、血改善微循环,还有抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种药理作用。丹参酮(tanshinone Tan)是丹参(saliva mitiorrhizabge)根茎中提取的一类的脂溶性成分,均含有邻醌或对醌结构,故总称丹参酮类化合物。其中尤其以丹参酮经磺化而形成的水溶性衍生物——丹参酮ⅡA磺酸钠(TIIA),表现出更多种生物活性,已经广泛的应用于心脑血管疾病的临床治疗,经大量的实验证实TIIA还具有较强的抗肿瘤,抗炎及抗氧化等药理作用。有研究报道,TⅡA对LPS诱导动物的肺损伤有保护作用,其机制包括通过抑制NF-KB的活化,降低磷脂酶A2(PLA2)的活性,减少一氧化氮等炎症因子而减轻肺损伤时的组织炎症;并且通过对抗细胞氧化和细胞凋亡,缓解肺组织细胞损伤而改善微血管的通透性等,然而TanⅡA对淹溺肺损伤的作用和机制尚未见报道。海水淹溺肺水肿(PE2SWD)主要表现为低氧血症和肺水肿,其损伤机制包括严重缺氧导致的肺功能异常,海水对肺泡上皮细胞的表面活性物质的破坏,海水导致炎性介质诱导的中性粒细胞的聚集后溶解酶和氧自由基过度释放,海水导致肺泡上皮细胞和肺微血管内皮细胞的直接损伤、水通道和离子通道改变、内皮素、降钙素和血红素氧合酶的改变。目前临床上仍缺乏理想的治疗措施。前期的研究发现,地塞米松可以通过抑制炎症而起到防治PE2SWD的作用,TanⅡA也可通过抑制炎症保护LPS诱导的肺损伤,然而TIIA在淹溺肺损伤的效应仍未见报道。因此本实验在大体及细胞实验中采用细胞免疫及分子生物学等多项技术,揭示淹溺肺损伤的炎症机制,探讨TIIA对淹溺肺损伤的保护作用及机制。目的:1.建立大鼠海水淹溺性肺损伤模型;2.探讨海水淹溺性肺损伤的炎症机制;3.揭示TIIA保护海水淹溺性肺损伤的机制。方法:1.本实验通过向气管内插管的大鼠肺内吸入适量海水,成功复制出符合海水淹溺的实际情况又符合ALI诊断标准的SWD一ALI动物模型.2. 24只大鼠分为正常对照组、海水淹溺组、丹参酮干预组及丹参酮对照组。淹溺组大鼠气管内注入4ml/kg海水,丹参酮组大鼠在造模后30分钟腹腔内注入TIIA(25 mg/kg),,于不同时间点检测PaO2的变化,通过检测HE染色改变观察肺组织结构的破坏,检测肺组织湿干比的变化观察肺组织水肿,通过检测MPO活性验证肺组织炎症细胞的浸润,并用Western-blot法和ELISA法分别检测MIF在肺组织和血浆中的表达。3.实验(一) NR8383细胞分为正常对照组,海水淹溺组,海水+ISO-1对照组,海水+TIIA干预组及TIIA对照组。海水淹溺组细胞上清中加入25%的海水,海水+TIIA干预组细胞上清液中加入10 ug/ml TIIA,海水+ISO-1组细胞上清中加入ISO-1(50uM)。取4小时时间点通过ELISA法检测细胞上清中MIF,IL-6与TNF-α的表达。Western-blot法检测phospho-NF-κB p65的表达。实验(二) NR8383细胞分为正常对照组,rMIF干预组,TIIA干预组。rMIF干预组细胞上清中加入rMIF(25ug/ml),TIIA干预组细胞上清中加入MIF(25ug/ml)后加入TIIA(10ug/ml),取4小时时间点通过ELISA法检测细胞上清中MIF,IL-6与TNF-α的表达。Western-blot法检测phospho-NF-κB p65的表达。结果:1.海水性淹溺肺损伤模型复制成功。2.相对于正常对照组,海水淹溺组大鼠出现肺水肿,低氧血症,并伴有肺组织损伤及炎症细胞的聚集,同时肺组织内MIF高表达,MPO活性随之增高。丹参酮干预后肺损伤减轻,MIF的高表达受到抑制,并伴有MPO活性降低。3.实验(一)海水淹溺组细胞MIF分泌增加,phospho-NF-κB p65及IL-6和TNF-α的表达也相应增加。ISO-1干预组中MIF表达正常但活性受到抑制,phospho-NF-κB p65及IL-6和TNF-α的表达相对于海水淹溺组明显减少,海水+TIIA干预组中细胞MIF分泌减少,phospho-NF-κB p65及IL-6和TNF-α的表达减少。TIIA对照组组中各细胞因子的表达相对于正常对照组无明显变化。实验(二) rMIF干预组细胞上清中phospho-NF-κB p65及IL-6和TNF-α的表达增加,rMIF+TIIA干预组细胞上清中phospho-NF-κB p65及IL-6和TNF-α相对于rMIF干预组的表达减少。结论:MIF诱发的炎症机制参与了海水淹溺性肺损伤的发生,丹参酮可能通过抑制MIF保护淹溺性肺损伤。

全文目录

缩略语表  6-7
中文摘要  7-10
Abstract  10-14
前言  14-15
文献回顾  15-22
  一海水淹溺肺损伤的发生机制  15-17
  二丹参酮ⅡA 及其主要药理作用及临床应用  17-22
实验一大鼠海水淹溺模型的复制  22-28
  1 材料  22-24
  2 实验方法  24-25
  3 实验结果  25-27
  4 讨论  27-28
实验二海水淹溺性肺损伤的炎症机制及TIIA 对淹溺肺损伤的保护作用  28-40
  1 材料  29
  2 实验方法  29-35
  3 结果  35-38
  4 讨论  38-40
实验三 TIIA 保护淹溺肺损伤的机制  40-50
  实验（一）验证淹溺肺损伤MIF诱导的炎症机制及TIIA 的保护机制  40-46
    1 材料  40-42
    2 实验方法  42-44
    3 结果  44-46
  实验（二）验证TIIA 对MIF诱导的细胞炎症因子的影响  46-50
    1 细胞分组  46
    2 试验方法  46-47
    3 结果  47
    4 讨论  47-50
小结  50-51
参考文献  51-57
个人简历和研究成果  57-58
  个人简历  57
  学习期间发表论文  57-58
致谢  58

丹参酮保护海水淹溺性肺损伤的机制研究

内容摘要

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