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活血止痛胶囊中土鳖虫的分子鉴定研究

作　者: 王云灵
导　师: 濮存海
学　校: 延边大学
专　业: 药剂学
关键词: 活血止痛胶囊土鳖虫 DNA提取 16S rRNA 测序
分类号: R286.0
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 72次
引　用: 1次
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内容摘要

活血止痛胶囊是国家基本药物目录所收录的药物之一,国家中药保护品种。其制剂处方为：当归、三七、乳香(醋)、土鳖虫、自然铜(煅)、冰片。该处方最早见报道于《赵炳南临床经验集》,是当代中医学治疗跌打损伤、瘀血肿痛的经典方剂。方中土鳖虫为臣药,在我国有悠久的药用历史。土鳖虫,又名地鳖虫、土元等,含多种氨基酸,挥发油,脂肪醛和芳香醛,生物碱,β-谷甾醇,鲨肝醇,尿嘧啶和尿囊素等,尚含多种微量元素。由于制剂中含有动物药,而动物药的质量标准现多为显微鉴定其刚毛等组织结构,该方法的鉴定标识在生物学上均为物种的遗传表现型,具有很大的变异性和可塑性,且受鉴定者主观判断影响较大,在复方药味复杂、药材显微形态多被破坏的情况下,显微鉴定多受限制。而薄层色谱法、高效液相色谱法等鉴别方法则只能鉴定药材中的一种或几种化学成分,若以提取物入药或直接加入某鉴定成分替代药材原粉入药,则采用此类方法难以鉴定。中药提高标准行动的开展,基本药物首当其冲。因此,亟需探索一种客观性强,直观可靠,且具有专一性的检验方法对活血止痛胶囊中的土鳖虫进行鉴定。本课题对活血止痛胶囊中的土鳖虫进行分子鉴定,成功从复方制剂活血止痛胶囊中鉴定了土鳖虫,并探索了一种适于土鳖虫DNA长期保存的处理方法,建立了一种提取基因组DNA的提取方法,经PCR扩增,获得土鳖虫16S rRNA序列,并构建了相关种属的系统进化树。在基于16S rRNA测序技术的土鳖虫分子鉴定研究中,针对土鳖虫传统处理方法DNA降解严重的缺点,探讨了热水烫死、无水乙醇、95%乙醇分别处死,烘干后保存0个月、3个月和6个月后DNA保存情况,结果显示95%乙醇处理的土鳖虫放置6个月后DNA保存完整性好,无降解。针对复方中药活血止痛胶囊药味复杂,基因组DNA提取困难的难题,本实验分别考察了蛋白酶K法、蛋白酶K结合吸附柱法和改良蛋白酶K结合吸附柱法提取土鳖虫和活血止痛胶囊基因组DNA,结果显示,三种方法均可以提取出质量良好的土鳖虫基因组DNA,但只有改良蛋白酶K结合吸附柱法可以成功提取到活血止痛胶囊中土鳖虫基因组DNA。

活血止痛胶囊中土鳖虫的分子鉴定研究

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