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川芎嗪对高糖或TNFα诱导后人腹膜间皮细胞IL6和IL8表达影响的实验研究

作　者: 陈利涛
导　师: 何劲松
学　校: 南京中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 肿瘤坏死因子α 川芎嗪 高糖 人腹膜间皮细胞 白细胞介素6 白细胞介素8
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


[背景]腹膜透析为终末期肾脏病患者替代治疗的重要手段之一,其主要并发症是腹膜纤维化。细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的过渡沉积为腹膜透析相关性腹膜纤维化主要特点。既往研究表明,常规高糖透析液可上调致纤维化细胞生长因子如IL-6和IL-8的表达,而后两者是重要的细胞因子,可导致腹膜纤维化。【目的】本研究通过观察川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells, HPMCs)在高糖及TNFa诱导后IL-6和IL-8分泌与表达的影响,进一步研究和探讨川芎嗪对HPMCs在高糖或TNFa诱导后致纤维化细胞生长因子表达的干预作用及其机制,为临床上腹膜纤维化的防治提供理论和实验依据。[方法]取自南京大学医学院附属鼓楼医院普外科择期腹部手术患者(排除尿毒症和腹膜炎)捐献的大网膜组织,采用胰蛋白酶法分离腹膜间皮细胞进行原代培养并传代,第三代细胞用于实验,每次实验均由来自3个患者的标本进行3次独立实验。用含1%FCS的RPMI-1640培养液同步24h后,试验分高糖环境和肿瘤坏死因子α诱导的炎症环境两部分进行,分组情况如下：①高糖环境下：HPMCs分为五组(每组设3个样本)观察：空白对照组(完全培养液),高糖(2.5%葡萄糖)诱导组,高糖(2.5%葡萄糖)加低、中、高剂量川芎嗪(10mg/L、20mg/L和40mg/L)组。采用单四唑(monotetrazolium, MTT)法检测各组间皮细胞的活性；半定量逆转录聚合酶链反应(Semi-quantitative reverse transcriptive-polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测细胞内IL-6和IL-8 mRNA表达；酶联免疫吸附测定(enzyme linkedimmunosorbent assay, ELISA)法检测细胞上清液中IL-6和IL-8蛋白质水平,细胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicacid, BCA)蛋白检测法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。②TNFα诱导下：HPMCs分为五组(每组设3个样本)观察：空白对照组(完全培养液),TNFα诱导组,TNFα加低、中、高剂量川芎嗪(10mg/L、20mg/L和40mg/L)组。采用单四唑(monotetrazolium, MTT)法检测各组间皮细胞的活性；半定量逆转录聚合酶链反应(Semi-quantitative reverse transcriptive-polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测细胞内IL-6和IL-8 mRNA表达；酶联免疫吸附测定(enzyme linkedimmunosorbent assay, ELISA)法检测细胞上清液中IL-6和IL-8蛋白质水平,细胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicacid, BCA)蛋白检测法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。[结果]①高糖环境下：与空白对照组比较,高糖能显著降低HPMCs活性(P<0.01),并显著上调HPMCs IL-6和IL-8的表达(P<0.01)；与高糖诱导组比较,川芎嗪干预组HPMCs活性显著升高(P<0.05),上清液中的IL-6和IL-8含量显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-6 mRNA和IL-8 mRNA表达水平均显著下调(P<0.05),且两者在蛋白和基因水平与川芎嗪呈量效关系；②炎症状态下：与空白对照组比较,TNFα能显著降低HPMCs活性(P<0.01),并显著上调HPMCs IL-6和IL-8的表达(P<0.01)；与TNFα诱导组比较,低剂量川芎嗪干预组HPMCs活性有所升高,但不具统计学意义(P>0.05),中、高剂量川芎嗪干预组HPMCs活性显著升高(P<0.05),低、中、高剂量川芎嗪干预组上清液中的IL-6和IL-8含量显著降低(P<0.05, P<0.01), IL-6 mRNA和IL-8 mRNA表达水平均显著下调(P<0.05),且两者在蛋白和基因水平与川芎嗪呈量效关系；[结论]川芎嗪能下调高糖或TNFα诱导后HPMC IL-6和IL-8的表达,并恢复HPMCs的活性,能保护HPMCs并减少ECM的过度沉积,从而产生预防和／或延缓腹膜纤维化发生发展的作用；

全文目录


摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
第一章: 研究背景  12-22
  1 腹膜透析相关性腹膜纤维化的机制及其防治的研究进展  12-16
    1.1 腹膜纤维化的机制  12-15
    1.2 腹膜纤维化的防治  15-16
  2 中医药在腹膜纤维化防治中的应用及川芎嗪的抗纤维化作用  16-19
    2.1 腹膜纤维化的中医病因病机  16
    2.2 目前临床常用防治腹膜纤维化的中药  16-17
    2.3 川芎嗪的抗纤维化作用  17-19
  参考文献  19-22
第二章: 川芎嗪对高糖或肿瘤坏死因子A诱导后人腹膜间皮细胞IL-6和IL-8表达影响的实验研究  22-39
  1 材料与方法  22-29
    1.1 材料来源  22
    1.2 实验方法  22-28
    1.3 统计学分析  28-29
  2 结果  29-34
    2.1 HPMCs鉴定  29-30
    2.2 细胞毒性  30
    2.3 HPMCs活性  30
    2.4 细胞上清液中HPMCs IL-6和IL-8活性蛋白质含量  30-32
    2.5 IL-6和IL-8 mRNA表达  32-34
  3 讨论  34-36
  4 结论  36-37
  参考文献  37-39
第三章: 附录——文献综述及英文缩略词  39-44
  文献综述  39-43
    参考文献  41-43
  英文缩略词  43-44
攻读硕士学位期间取得的学术成果  44-45
致谢  45

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