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维生素D与代谢综合征的关系及其对前脂肪细胞增殖分化的影响

作　者: 韩桂艳
导　师: 王姮；邢小平；龚凤英；朱惠娟；王鸥
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 内分泌临床
关键词: 代谢综合征 维生素D缺乏 干预研究 1，25（OH）2D3 3T3-L1细胞 增殖 分化 脂代谢 脂肪因子
分类号: R589
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


背景：维生素D除了经典的调节钙、磷代谢的作用外,近期研究发现其与免疫系统、细胞的分化增殖以及其它内分泌腺体之间有重要的关系。有研究提示低维生素D水平与代谢综合征(Metabolic syndrome, MS)间存在相关性,但结论尚不统一,是否低维生素D状态与MS的危险因素?肥胖是MS的中心环节,是否维生素D对肥胖的发生、脂质的代谢存在直接影响?目前尚不明确。目的：1)观察MS组与对照组间血25(OH)D水平的差异,及25(OH)D与MS的相关性,通过前瞻性干预研究观察MS相关指标改善后血25(OH)D水平的变化2)通过体外细胞实验探讨1,25(OH)2D3对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响。方法：1.临床研究：1)病例对照研究：收集北京平谷地区MS患者171人,血压、血糖正常的非肥胖者63人作为对照,测量人体测量学指标的同时测定生化指标,比较MS患者与对照人群血25(OH)D水平的差异,了解该组人群25(OH)D与MS间是否存在相关性。2)前瞻性干预研究：对171名MS患者饮食运动干预,部分患者给予药物干预1年,比较干预前后随着MS相关指标改善,血25(OH)D水平的变化。2.体外研究：1)以无血清培养基培养3T3-L1细胞,以MTT法观察1,25(OH)2D3对细胞增殖的影响。2)采用含胰岛素、地塞米松与IBMX的分化培养基诱导分化3T3-L1细胞,用油红O染色及甘油三酯测定量分析法观察1,25(OH)2D3对3T3-L1细胞分化的影响。3)于增殖第7天及诱导分化后第4天、第12天收集细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR观察1,25(OH)2D3对细胞增殖、凋亡相关基因(CyclinD1、Bax和BCL-2),维持分化相关转录因子(PPARγ、CEBP／a),以及脂质代谢相关酶(ACC1、ACS1、G3DPH、HSL)及脂肪因子(Adiponectin、Visfatin)表达的影响。结果：1)与正常对照人群相比,MS患者维生素D缺乏(<20ng／m1)所占比例较高(90.1%vs 79.4%),OR=2.192(1.1191,4.295),P=0.021。MS与BMI及年龄相关[r=1.857(1.549,2.226),P<0.0005,r=1.126(1.066,1.188),P<0.0005],未发现MS与25(OH)D及PTH间存在相关性。肥胖患者血25(OH)D水平明显低于非肥胖者(13.97±4.17 vs 15.22±4.80ng／ml,P=0.041),PTH水平两组间无统计学差异。多元线性回归分析显示,MS组血25(OH)D与TC(B=-0.189,P=0.025)、HDL-C(B=-0.188,P=0.025)水平呈负相关。干预1年后随着患者体重减轻、BMI及腰围减小、血糖降低、胰岛素抵抗减轻及甘油三酯的下降,血25(OH)D水平明显增高(14.40±4.03 vs 16.11±4.02 ng／ml,P<0.0005)。多元线性回归分析,提示A25(OH)D与ATG相关(B=0.195,P=0.014)。2)体外细胞实验发现,1,25(OH)2D3对3T3-L1细胞增殖有明显抑制作用,该作用呈剂量依赖性,10-7M、10-8M、10-9M浓度组OD值分别为对照组的39.8±4.0%、48.4±6.9%及64.3±9.7%(P<0.05)。当药物浓度等于10-10M时抑制作用明显减弱,OD值为对照组的79.8±9.9%(P<0.05)。1,25(OH)2D3可抑制增殖相关基因Cyclin D1的表达。1,25(OH)2D3可以剂量依赖性方式抑制3T3-L1细胞分化,分化第12天细胞内甘油三酯的含量降低,10-8M、10-9M浓度组较对照组分别降低13.3%和9.8%,P值分别为0.013、0.027。当浓度小于等于10-10M时抑制作用消失。1,25(OH)2D3可抑制PPARγ、C／EBPa mRNA及HSLmRNA的表达,促进G3PDH、ACC1及ACS1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性。同时1,25(OH)2D3可明显抑制Adiponectin、Visfatin mRNA表达,随着药物浓度降低,作用减弱。结论：1)本研究发现MS组维生素D缺乏者所占比例明显高于正常人,但未发现MS与25(OH)D及PTH水平间存在相关性。干预1年后,随体重、BMI、腰围、FBG及TG降低,25(OH)D水平增高。2)1,25(OH)2D3对3T3-Ll细胞的增殖、分化有抑制作用,该作用可能通过抑制Cyclin D1、PPARγ及C／EBPa基因表达实现。同时可影响脂质代谢相关酶G3PDH、ACC1、ACS1、HSL及脂肪因子Adiponectin、Visfatin mRNA的表达。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
英文缩略词  10-12
主要仪器设备及实验材料  12-18
  主要仪器设备  12-13
  主要试剂  13-15
  试剂配制  15-18
前言  18-22
第一部分 维生素D与代谢综合征的关系  22-37
  对象与方法  22-25
    1.研究对象  22-23
    2.研究方法  23-24
    3.统计分析  24-25
  结果  25-32
    1.基线时MS与对照组相关指标的比较  25-30
      1.1 MS患者与对照组维生素D水平的差异  25-26
      1.2 25(OH)D与MS及其组分的相关性  26
      1.3 影响血25(OH)D水平的相关因素  26-30
    2 MS干预前后血25(OH)D水平及MS相关指标的变化  30-32
  讨论  32-36
  结论  36-37
第二部分 1,25(OH)_2D_3对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响  37-73
  引言  37-39
  材料与方法  39-52
    1.实验材料  39
    2.所用试剂(详见试剂配制部分)  39
    3.实验方法  39-51
      3.1 3T3-L1小鼠前脂肪细胞系培养  39-41
      3.2 3T3-L1小鼠前脂肪细胞增殖实脸  41-42
      3.3 3T3-L1小鼠前脂肪细胞分化实验  42-44
      3.4 实时荧光定量RT-PCR实验  44-51
    4.统计方法  51-52
  研究结果  52-68
    1. 1,25(OH)_2D_3对3T3-L1细胞增殖的影响  52-57
      1.1 3T3-L1细胞增殖曲线  52
      1.2 1,25(OH)_2D_3对3T3-L1细胞增殖的影响  52-55
      1.3 1,25(OH)_2D_3影响3T3-L1细胞增殖可能涉及的相关基因  55-57
    2. 1,25(OH)_2D_3对3T3-L1细胞分化的影响  57-68
      2.1 3T3-L1细胞分化过程中细胞形态和细胞内脂质含量的变化  57-58
      2.2 1,25(OH)_2D_3对3T3-L1细胞诱导分化第12天细胞内脂质含量的影响  58-61
      2.3 1,25(OH)_2D_3对3T3-L1细胞分化可能作用的靶点基因表达的影响  61-68
  讨论  68-72
  结论  72-73
参考文献  73-81
综述  81-89
致谢  89-90

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 代谢病
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