学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
FHL2对心脏HERG钾离子通道表达的调控作用
作 者: 李妍妍
导 师: 林吉进
学 校: 汕头大学
专 业: 内科学
关键词: HERG钾通道 FHL2 蛋白质-蛋白质相互作用 长QT综合征
分类号: R331
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 16次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
研究背景:由人类果蝇相关基因――HERG (Human ether-a-go-go-related gene)编码的心脏HERG钾通道属于电压依赖性钾通道,介导快速激活延迟整流钾电流(rapidly activated delayed rectifier potassium currents, Ikr)。HERG基因的突变将导致第二型的长QT综合征(long QT syndrome,LQTS)。蛋白质-蛋白质相互作用是维持细胞生命活动的重要基础,信号转导、细胞周期调控、DNA复制、RNA转录、蛋白质翻译、蛋白质翻译后加工修饰等功能的完成依赖于蛋白质-蛋白质的相互作用。既往的研究表明FHL1通过与心脏钾通道相互作用而发挥调控该通道所介导电流IKs ( the slowly activating component of the delayed rectifier K+ current, IKs )的功能。IKs和Ikr电流都属于延迟整流钾电流,是构成心脏动作电位第3相的主要外向电流,对心脏复极发挥极其重要的作用。而FHL1和FHL2的氨基酸构成有着47%的同源性。本实验的前期工作通过酵母双杂交技术、GST pull-down发现了FHL2与心脏HERG钾通道存在相互作用。在此基础之上,本实验进一步研究FHL2对心脏HERG钾通道表达的调控作用,旨在更深刻了解心脏HERG钾通道的调控机理,为LQTS的治疗提供新思路。目的:阐明FHL2对心脏HERG钾通道道白表达水平的调控作用,进一步明确FHL2对心脏HERG钾通道功能的影响作用。方法:(1)以PCR法扩增FHL2基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),并分别在其5’端及3’端加上EcoRI和XhoI酶切位点,将其克隆进入载体pcDNA3.0构建重组质粒pcDNA3.0-FHL2。(2)原代乳鼠心肌细胞的培养:取出生24 h内大鼠左心室,剪碎, 0.25%胰蛋白酶分离,离心收集心肌细胞,差速贴壁法和化学试剂法抑制非心肌细胞生长,纯化后培养于DMEM培养基。(3)利用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.0-FHL2、针对人类FHL2的siRNA分别转染乳鼠原代心肌细胞。(4)将转染后乳鼠心肌细胞提取的蛋白用Western blot检测蛋白质表达水平:分别加入FHL2一抗(鼠来源)和HERG一抗(羊来源),验证FHL2对HERG钾通道蛋白表达的影响。(5)FHL2和HERG在HEK-293细胞的表达:应用脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒pcDNA3.0-HERG转染HEK-293细胞,以及将pcDNA3.0-FHL2、pcDNA3.0-HERG共转染HEK-293细胞,免疫荧光细胞化学分析,应用抗HERG和抗FHL2的抗体显示HERG及FHL2的细胞定位。(6)在HEK-293细胞中,利用膜片钳技术,研究FHL2对HERG钾通道功能的影响。结果:(1)成功构建重组质粒pcDNA3.0-FHL2,酶切鉴定及测序结果正确。(2)针对FHL2的siRNA通过Lipofectamine 2000转染乳鼠原代心肌细胞后,Western blot检测FHL2蛋白的表达量减少,而转染重组质粒pcDNA3.0-FHL2的乳鼠心肌细胞,Western blot检测FHL2蛋白的表达量增加。(3)FHL2蛋白抑制表达时,HERG钾通道蛋白表达量减少;FHL2过度表达时,HERG钾通道蛋白表达量增加。(4)膜片钳检测发现,在HEK-293细胞单独表达HERG时,电流为400±30 pA,同时表达HERG和FHL2时,电流增加到839±44 pA,两组之间进行t检验,t =-30.614, p=0.000, p<0.001,可见FHL2在增大HERG电流幅度的同时并调节其激活过程。结论:FHL2蛋白的过度表达能上调心肌细胞HERG钾通道的表达水平,并使HERG钾通道电流振幅增大;FHL2蛋白的抑制表达能下调心肌细胞HERG钾通道的表达水平。本实验结果提示FHL2对心脏HERG钾通道的表达及功能具有正性调控作用,这一结果将为开发治疗LQTS的新型蛋白质药物提供新思路。
|
全文目录
中文摘要 4-6 英文摘要 6-8 英文缩略词表 8-10 前言 10-13 实验仪器与材料 13-22 实验方法 22-33 实验结果 33-41 讨论 41-44 结论 44-45 参考文献 45-48 综述 48-57 参考文献 53-57 致谢 57-58 发表论文情况 58-59 个人简介 59-60 附件 60
|
相似论文
- Takotsubo心肌病诊治2例,R542.2
- 基于覆盖算法的蛋白质相互作用位点预测,TP18
- 蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12与心脏HERG钾通道相互作用并调控通道功能的研究,R331
- 面向分子生物系统的计算技术应用研究,Q7-3
- 心脏HERG钾通道相互作用蛋白的筛选及其对该通道调控功能的研究,Q78
- 探索FHL2在斑马鱼中的同源基因对其发育的影响,S917.4
- AWP1与整合素α_v的相互作用及其生物学功能研究,R341
- KCNA5蛋白与FHL2蛋白的相互作用,Q78
- 基于支持向量机和蛋白质全序列的蛋白质—蛋白质相互作用预测,Q51
- 氟康唑对hERG钾通道电生理功能的影响,R96
- MCM5基因的克隆和真核表达及其与P53相互作用的鉴定,Q78
- 人类心脏发育候选新基因hnulp1的克隆与功能研究,Q78
- 基于线粒体膜间隙蛋白质相互作用网络的基因功能研究,Q3
- Sp1对FHL2转录调控机制的研究,R73-3
- 引起遗传性长QT综合征的hERG基因突变E444D的结构和功能研究及酒精对hERG通道的作用研究,R541.7
- FHL2基因在大肠癌发生与去分化中的作用,R735.34
- 蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱对获得性长QT综合征的作用及机制研究,R259
- 重组FHL2的原核表达、纯化及抗血清的制备,R392
- 新型凝集素LSECtin相互作用蛋白研究及基因打靶载体构建,Q78
- 生物信息学方法研究蛋白质相互作用,Q811.4
中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生理学 > 血液与循环生理
© 2012 www.xueweilunwen.com
|