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小鼠肺纤维化模型中CD4~+CD25~+调节性T细胞及相关细胞因子的研究

作　者: 王镇
导　师: 陈信波
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 肺纤维化 细胞因子 流式细胞术 Treg细胞 悬浮芯片技术
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


特发性肺纤维化是一种慢性而致命的肺部失调疾病。持续的肺纤维化会导致肺功能的丧失最终导致死亡。导致肺纤维化的原因很多,其中的分子机制依然不明朗,且存在很多争论。有很多证据表明,纤维细胞的增生、细胞外基质的沉积和疤痕的积累是肺纤维化的特征标志,而这些则会导致不恰当的、不受调控的组织重建。传统的免疫学治疗法效果很差,这提示我们肺纤维化可能有其他的发病机制。近年来对CD4+CD25+T调节细胞(CD4+CD25+T regulatory cell, Treg)的研究取得到了较大进展。本实验通过建立博来霉素(bleomycin, BLM)诱导的肺纤维化模型,检测Treg细胞亚群在T淋巴细胞中的动态变化,探索了Treg细胞和其关的细胞因子是否在肺纤维化中起到了重要作用。主要结果如下：1.BLM组中的小鼠外周血中的T淋巴细胞在2天、4天、8天和16天时显著大于空白组。BLM组中的小鼠肺灌洗液中的T淋巴细胞在8天时显著高于空白组,其它时间点无明显差异。2.BLM组的小鼠外周血中的CD25+Foxp3+T细胞在CD4+T细胞中的比例在第4天时显著低于其它两组,其它时间点无显著差别。BLM组的小鼠肺灌洗液中的始终处于显著低水平。3.BLM组小鼠外周血中Treg细胞的浓度在2天和4天时显著降低,在8天和16天显著升高,32天时组间无明显差异。BLM组小鼠肺灌洗液中Treg细胞的浓度在4天、8天和16天时显著高于空白组。4.BLM组肺灌洗液中的IL-21在2天、16天和32天时显著降低。BLM组肺灌洗液中的TGF-β各组间各时间点无显著性差异。在BLM组肺灌洗液中,IL-1α在2天、8天、16天和32天时显著低于空白组；IL-1β在各组间各时间点无显著性差异；IL-2在2天、8天和16天时显著低于空白组；IL-4在16天时显著低于空白组；IL-6在2天、4天、8天和16天时显著高于空白组,而空白组和生理盐水各组间无明显差异；IFN-γ在2天、4天、8天和16天时显著低于空白组。结论：Treg细胞在CD4+T细胞中的比例减少在肺纤维化的发生发展过程中起着重要作用。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章 前言  9-15
  1 肺纤维化(PF)研究的进展  9-10
    1.1 肺纤维化现况  9
    1.2 肺纤维化相关的的主要细胞和细胞因子  9-10
    1.3 肺纤维化模型的建立  10
  2 Treg细胞的研究进展  10-13
    2.1 Treg细胞的分类与成熟过程  10-11
    2.2 Treg细胞的特征标记  11-12
    2.3 Treg细胞与人类疾病  12-13
  3 流式细胞技术  13-15
    3.1 流式细胞术特点与应用  13-14
    3.2 流式细胞术的原理  14-15
第二章 材料与方法  15-22
  1 材料与试剂  15-17
    1.1 实验动物  15
    1.2 主要试剂  15
    1.3 常用实验仪器  15-16
    1.4 主要溶液的配制  16-17
  2 实验方法  17-22
    2.1 博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型的建立  17
    2.2 抗凝血的制备  17-18
    2.3 肺灌洗液的制备  18
    2.4 抗凝血和肺灌洗液中淋巴细胞计数  18
    2.5 流式细胞法检测Treg细胞步骤  18-19
    2.6 ELISA法测定小鼠转化生长因子-β、白细胞介素-21  19-20
    2.7 悬浮芯片法测定肺灌洗液中的IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ  20
    2.8 统计学分析  20-21
    2.9 Masson染色法检测小鼠肺部标本  21-22
      2.9.1 肺组织标本制备  21
      2.9.2 Masson染色步骤  21-22
第三章 结果与分析  22-36
  1 小鼠术后状态观察  22
  2 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液淋巴细胞计数结果  22-23
    2.1 不同时期小鼠外周血淋巴细胞计数结果  22-23
    2.2 不同时期小鼠肺灌洗液淋巴细胞计数结果  23
  3 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液Treg细胞流式检测结果  23-28
    3.1 不同时期小鼠外周血Treg细胞流式检测结果  23-26
    3.2 不同时期小鼠肺灌洗液Treg细胞流式检测结果  26-28
  4 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液Treg细胞占淋巴细胞比例  28-29
    4.1 不同时期小鼠外周血Treg细胞占淋巴细胞比例  28
    4.2 不同时期小鼠肺灌洗液Treg细胞占淋巴细胞比例  28-29
  5 不同时期小鼠外周血、肺灌洗液Treg浓度变化  29-30
  6 肺灌洗液中细胞因子检测结果  30-33
    6.1 ELISA检测肺灌洗液中的IL-21  30
    6.2 ELISA法检测肺灌洗液中的TGF-β  30-31
    6.3 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-1α  31-32
    6.4 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-1β  32
    6.5 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-2  32
    6.6 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-4  32-33
    6.7 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IL-6  33
    6.8 悬浮芯片法检测肺灌洗液中的IFN-γ  33
  7 小鼠肺组织病理切片Masson法染色结果  33-36
第四章 总结与讨论  36-39
全文总结、创新点与下一步研究计划  39-40
  1 结论  39
  2 创新点  39
  3 下一步研究计划  39-40
参考文献  40-44
英文缩略词表(abbreviations)  44-45
致谢  45-46
作者简介  46
  个人信息  46
  教育背景  46
  在读期间发表论文  46

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中图分类: > 医药、卫生 > 医学研究方法 > 实验医学、医学实验 > 医用实验动物学
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