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肾癌占到全身恶性肿瘤的3%,在泌尿系统肿瘤中的发病率仅次于膀胱癌,其发病率大多在40岁,其发病率3.7/10万,肾脏肿瘤的发病主要特点是隐匿性,转移性较其他脏器肿瘤早并且缺乏特异性,早期诊断较为困难,尤其是影像学表现不典型时,肾癌的影像学与肾脏的良性实性占位病变的鉴别较为困难。因此,如何寻找肾脏肿瘤的特异性抗原,是研究提高肾癌治疗效果的一大课题。在对肾肿瘤相关抗原(TAA)的研究中,发现碳酸酐酶9(carbonic anhydrase IX, CA IX)和细胞角蛋白(CK19Mrna)具有良好的肿瘤特异性。碳酸酐酶9是新的碳酸酐酶家族(CAs)异构体之一,其在肾细胞癌中表达的程高,在我们目前知道的肾细胞癌分子标记物中占有重要的地位,但其在肾癌的诊断和术后的微转移方面研究的较少。细胞角蛋白(CK19mRNA)是近年来发现的肿瘤标记物之一,细胞角蛋白对于维持细胞的连续性和细胞形态的稳定具有重要的作用,细胞胶蛋白具有组织和分化的特异性及高度的保守型并在细胞的信号传导,细胞的增殖,分化；细胞的凋亡方面起着重要的作用,目前,细胞胶蛋白19在甲状腺癌,胃癌及宫颈癌研究较多,但在肾癌术后微转移方面的研究较少,本实验主要研究细胞胶蛋白在肾癌中的应用。碳酸酐酶9和细胞角蛋白对于我们在临床工作中对肾细胞癌术前诊断和术后监测是否伴有肿瘤细胞的微转移具有重要意义本实验采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从RNA水平研究碳酸酐酶9(carbonic anhydrase IX,CA IX)术后外周血的表达情况及从RNA水平研究细胞角蛋白(CK19Mrna)在肾癌根治术前和术后及术后外周血的表达情况,并分析二者在肾癌发生过程过程中的机制,并探讨二者作为微转移标记物在肾癌中的应用。材料和方法碳酸酐酶9(carbonic anhydrase IX,CA IX)试验标本收集郑州大学第二附属医院泌尿外科,河南省人民医院泌尿外科,河南省肿瘤医院外科2008年9月至2011年1月肾癌患者的外周血液标本,共40例,其中男性28例,女性22例,分别与术后6、12、18、24、30、36个月于清晨空腹抽取外周血各一份。同时根据情况选择体格检查及B超/CT/MRI/胸部X线检查。血液标本每份3ml,置于EDTAk2负压抗凝管中防止凝结,及时提取其总RNA,冻存于-80℃冰箱中,利用RT-PCR法以GAPDH为内参照,检测上述标本中CAIX mRNA的表达,并对外周血中CAIX mRNA水平行半定量测定。细胞角蛋白(CK19MRNA)试验标本收集郑州大学第二附属医院泌尿外科,河南省人民医院泌尿外科,河南省肿瘤医院外科2010年1月至2011年1月肾癌组织及肾癌患者的外周血液标本,共32例,其中临床Ⅰ期患者8例,临床Ⅱ期患者11例,临床Ⅲ～Ⅳ期患者13例,临床病理类型：肾脏透明细胞癌,肾脏嗜色细胞癌,肾脏嫌色细胞癌,分别为22例,8例,2例。作为参照,同时取10例正常组织和10例取自距癌灶边缘3Cm以上癌旁非癌性正常组织。在术前标本收集过程中,所有患者均未做过任何治疗,组织标本均经病理证实,组织标本术中取出后立即置于冻存管中,并迅速转植入-80℃冰箱冻存防止组织中的mRNA降解。16例健康志愿者于晨起空腹时采血；血液标本量为每份3ml,肾癌患者分别在术前2小时及行肾癌根治术后一周、第二周、第三周、第四周时晨起空腹采血各一份,血液标本量为每份3ml,置于EDTAK抗凝管中,并及时提取其总RNA,并立即冻存于-80℃冰箱中以防止降解,。试验采用RT-PCR法以GAPDH为内参照,检测标本中CK19 mRNA的表达,并对外周血中CK19mRNA水平行半定量测定。两种试验均采用SPSS10.0软件进行统计分析,具有统计学意义差异的检验标准α=0.05。实验结果在Ⅰ期肾癌的患者的根治术后6个月至术后36个月中,肾癌患者在18个月和24个月时间段表达有两例转阴,在肾癌Ⅱ期根治术后18,24,30个月时间段共有4例患者CAIXmRNA表达转阴,在Ⅲ～Ⅳ期肾癌无患者CAIXmRNA表达转阴,在术后6个月至术后36个月Ⅲ～Ⅳ肾癌中共有7例患者死亡。肾癌患者术后术后6个月至术后36个月各时间段内Ⅰ期,Ⅱ期,Ⅲ～Ⅳ期差异具有统计学意义。肾癌患者外周血中CAIX mRNA半定量水平术后6月为0.313±0.078、术后12月0.275±0.064,术后18月,0.178±0.055,术后24月0.144±0.041,术后30月0.129±0.023,术后36月0.120±0.018。RCC患者外周血CAIX mRNA水平在肾癌根治术后随时间的推移呈明显下降趋势(F=38.644,P<0.01)。各组间比较统计学意义(f=104.559,P=0。000,P<0.005)。在32例肾癌组织中,细胞胶蛋白19(CK19)的总的阳性表达率为76%(24/32),而癌旁组织和正常组织分别为5.6%和0%,肾癌组织和二者相比较显著高于二者(P均<0.01),而对后二者进行比较,差异没有统计意义(P>0.05),CK19mRNA在病理类型为透明细胞癌的表达阳性率为85.7%(19/22),在病理类型为嗜色细胞癌的表达阳性率为39.6%(3/8)在病理类型为嫌色细胞癌的表达阳性率为0%(0/2)细胞胶蛋白19在透明细胞癌的阳性表达率和病理类型为嗜色细胞癌及嫌色细胞癌相比较差异具有统计学意义(P<0.05)表达的阳性率高于后二者,但病理类型为嗜色细胞癌和病理类型嫌色细胞癌之间细胞胶蛋白19(CK19)阳性表达率相比差距没有统计学意义。32例肾癌患者的外周血中细胞角蛋白19(CK19)总的阳性表达率为56.2%(18/32),在16例健康人的对照组中细胞角蛋白19(CK19)阳性表达率为3.4%(4/16)以肾癌患者的外周血中细胞角蛋白19(CK19)总的阳性表达率和健康人的对照组中细胞角蛋白19(CK19)阳性表达率进行比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞角蛋白19在肾癌Ⅰ期的阳性表达率为28%(3/8),在肾癌Ⅱ期的阳性表达率为41%(5/11),在肾癌Ⅲ～Ⅳ期的阳性表达率为79%(10/13)。其中肾癌Ⅰ期,肾癌Ⅱ期,肾癌Ⅲ～Ⅳ期三者之间相比有统计学意义(P<0.05),肾癌Ⅰ期,肾癌Ⅱ期之间相比没有统计学上的意义,但肾癌Ⅲ～Ⅳ期和前二者相比差异有统计学意义,阳性表达率显著高于前两组。在肾癌患者的外周血中有阳性表达的18例中,其细胞胶蛋白19核糖核酸(CK19mRN)的表达水平,术前两天为0.49±0.11,术后一周为0.41±0.13,术后两周为0.29±0.11,术后三周为0.24±0.16,术后四周为0.17±0.09,从整体看细胞胶蛋白19核糖核酸是在肾癌根治术后随着时间的推移逐渐降低的(P均<0.05)。结论1:CAIX mRNA在肾癌的患者中,随着时间的推移其表达量呈下降的趋势,表明其是一种很好的肿瘤标记物,其在肾癌的发生和发展的过程中起着重要的作用,对我们在肾癌的诊断方面提供指导作用。2：在试验中我们可以看到CK19MRNA在肾癌的不同的病理类型及非肿瘤之间的表达具有很大的差异,表明其可以作为肿瘤的标记物之一,在不同的分期中其表达的量也有很大的不同,表明其和肾癌的分期有关系。3：肾癌的组织中对CK19MRNA和CAIX mRNA的检测,能更好的判断患者的术后的微转移,判断预后,提供合理的治疗方案,具有重要的意义。
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