学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

斑蝥素干预急性髓细胞性白血病端粒酶逆转录酶（hTERT）甲基化的研究

作　者: 申振涛
导　师: 徐瑞荣
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 斑蝥素急性髓细胞性白血病端粒酶逆转录酶甲基化逆转录-聚合酶链式反应甲基化特异性聚合酶链反应
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 47次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：研究中药提取物斑蝥素对端粒酶逆转录酶(hTERT)甲基化的影响,以期阐明斑蝥素对hTERT是否存在去甲基化治疗作用,探讨斑蝥素治疗急性髓细胞性白血病的作用机制。方法：采用HL-60细胞株,注入经60Co 200cGy辐射后的NOD/SCID小鼠体内,建立NOD/SCID小鼠一人急性白血病模型,分为实验组和空白组,实验组应用斑蝥素进行干预。RT-PCR法观察空白组和实验组hTERT mRNA的表达,MSP法观察空白组和实验组hTERT甲基化状态,对结果进行分析。结果：空白组和实验组经肝、脾、股骨病理证实造模成功；斑蝥素能明显延长白血病模型小鼠的生存时间(P<0.01),并对小鼠外周白细胞影响明显(P<0.01)；斑蝥素能明显下调hTERT mRNA的表达(P<0.01)；但空白组和实验组均存在hTERT甲基化。结论：斑蝥素能够下调hTERT mRNA的表达；定性MSP未能证实斑蝥素对hTERT启动子产生明显去甲基化治疗作用,尚需采用实时荧光定量MSP进一步研究。

全文目录

提要  3-4
Abstract  4-8
引言  8-9
实验研究  9-23
  一、实验材料  9-11
    (一) 主要仪器  9
    (二) 主要试剂  9-11
  二、主要溶液的配制方法  11-12
    (一) DEPC水的配制  11
    (二) 无RNA酶水的配制  11
    (三) RPMI-1640培养基配制  11
    (四) 冻存液配制  11
    (五) 磷酸盐缓冲液(PBS)  11
    (六) 无RNA酶75%乙醇的配制  11
    (七) 电泳缓冲液的配制  11-12
  三、实验方法  12-19
    (一) NOD/SCID小鼠  12
    (二) HL-60细胞培养  12
    (三) 细胞的冻存  12
    (四) 细胞复苏  12
    (五) 细胞浓度调整  12-13
    (六) 斑蝥素的配制及应用  13
    (七) NOD/SCID小鼠预处理及造模  13
    (八) 一般情况记录  13
    (九) 骨髓涂片  13
    (十) 病理  13-14
    (十一) 外周血常规  14
    (十二) 骨髓单个核细胞的收集  14
    (十三) 细胞总RNA的提取  14
    (十四) 总RNA的测定  14-15
    (十五) RT-PCR一步法反应  15-16
    (十六) 细胞总DNA提取  16
    (十七) DNA修饰  16-18
    (十八) DNA扩增  18
    (十九) DNA电泳  18-19
  四、统计方法  19
  五、实验结果  19-23
    (一) 造模后小鼠的一般情况及生存时间  19-20
    (二) 病理结果  20-21
    (三) 造模后各组小鼠外周血常规统计结果  21-22
    (四) RT-PCR半定量检测HTERT MRNA表达情况  22
    (五) MSP法检测HTERT启动子甲基化  22-23
讨论  23-34
  一、NOD/SCID小鼠  23-25
    (一) NOD/SCID小鼠的来源  23-24
    (二) SCID小鼠-人白血病模型的建立  24
    (三) SCID-人白血病模型的应用  24-25
  二、端粒酶、端粒酶逆转录酶  25-28
    (一) 端粒  25
    (二) 端粒酶  25
    (三) HTERT基因的结构特点和意义  25-26
    (四) DNA甲基化与去甲基化  26
    (五) DNA甲基化与白血病  26-27
    (六) HTERT的甲基化调节  27-28
    (七) 端粒酶在白血病细胞中的表达  28
  三、中医药对白血病的研究现状  28-30
    (一) 临床治疗方面  28-29
    (二) 实验研究  29-30
  四、斑蝥素对恶性肿瘤的干预作用  30-31
    (一) 诱导肿瘤细胞凋亡  30-31
    (二) 抗肿瘤细胞的侵袭和转移  31
    (三) 逆转多药耐药  31
    (四) 直接作用于肿瘤干、祖细胞  31
  五、实验结果及分析  31-34
结语  34-35
参考文献  35-40
综述  40-48
  参考文献  44-48
致谢  48-49
论文著作  49-52
中文详细摘要  52-57

斑蝥素干预急性髓细胞性白血病端粒酶逆转录酶（hTERT）甲基化的研究

内容摘要

全文目录

相似论文