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PCDH10在前列腺癌细胞系中的表达特征与调控机制

作　者: 李文杰
导　师: 桂耀庭
学　校: 汕头大学
专　业: 生殖生理学
关键词: PCDH10 启动子甲基化前列腺癌
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨原钙粘附蛋白10（Procadherin 10, PCDH10）基因在前列腺癌细胞系中的表达特征与调控机制。方法：采用半定量RT-PCR、荧光定量RT-PCR、蛋白印迹（Western Blotting）、免疫荧光染色法、甲基化特异性PCR（MSP）或亚硫酸盐基因组测序（BGS）等方法，检测PCDH10在前列腺癌组织或四种细胞系（22RV1、PC3、DU145和LNCaP）中的表达特征及启动子甲基化的状态。采用DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷（AZA）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（TSA）处理前列腺癌细胞系，以探讨DNA甲基化和组蛋白去乙酰化对PCDH10基因转录的调控作用。结果：PCDH10 mRNA在人子宫、卵巢、甲状腺、食道、胃、肝、前列腺、睾丸和肾组织中均有表达，在前列腺组织中表达较高。与正常前列腺组织相比，PCDH10在前列腺癌细胞系中的表达明显减少或消失，其表达量与PCDH10启动子甲基化呈负相关。四种前列腺癌细胞系经AZA处理后，PCDH10在22RV1、PC3和LNCaP细胞系中启动子甲基化的密度均显著降低，其mRNA的表达明显升高；TSA处理后，PCDH10 mRNA在LNCaP细胞系的表达明显增加，而在22RV1、PC3和DU145三种细胞系中的表达无显著差异；将AZA与TSA联合使用，结果显示，两者对PCDH10 mRNA的表达具有协同作用。结论：PCDH10在前列腺癌细胞系中的表达明显减少或消失，其下降程度与PCDH10启动子CpG岛的甲基化状态呈负相关。PCDH10在前列腺癌细胞系中启动子甲基化和组蛋白去乙酰化可能是PCDH10低表达的分子机理。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
缩略语及符号表  6-9
第1章前言  9-14
  1.1 DNA甲基化在肿瘤发生中的作用  9-10
  1.2 前列腺癌的研究概况  10-11
  1.3 PCDH10基因  11-14
第2章材料与实验方法  14-24
  2.1 材料  14-18
    2.1.1 细胞和组织  14
    2.1.2 引物合成  14-15
    2.1.3 主要试剂  15-17
    2.1.4 主要仪器  17-18
  2.2 实验方法  18-24
    2.2.1 基因组DNA的提取  18
    2.2.2 总RNA的提取  18
    2.2.3 cDNA的合成  18-19
    2.2.4 半定量RT-PCR  19
    2.2.5 实时荧光定量PCR  19
    2.2.6 细胞培养  19-20
    2.2.7 细胞转染  20-21
    2.2.8 免疫细胞荧光迹  21
    2.2.9 蛋白提取与蛋白印迹  21-22
    2.2.10 DNA甲基化修饰  22-24
第3章结果  24-31
  3.1 PCDH10 mRNA 在人体组织中的表达特征  24-25
  3.2 PCDH10 mRNA 在前列腺组织和前列腺癌细胞系中的表达特征  25-26
  3.3 PCDH10 蛋白在前列腺组织和前列腺癌细胞系中的表达特征  26-27
  3.4 PCDH10 蛋白在前列腺癌细胞内定位  27-28
  3.5 PCDH10 在前列腺癌细胞系中的甲基化状态  28-29
  3.6 AZA 和TSA 对PCDH10 表达和启动子的甲基化状态的影响  29-31
第4章讨论  31-33
第5章总结  33-34
参考文献  34-41
附录  41-44
发表及收录论文情况  44-45
致谢  45-46
本人简历  46

PCDH10在前列腺癌细胞系中的表达特征与调控机制

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