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吸烟致肺癌差异基因筛选及TG2功能研究

作　者: 姚虎胜
导　师: 易克；卢向阳；朱茂祥
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 肺癌基因芯片差异表达基因卷烟烟气恶性转化
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

肺癌是人类最常见的恶性肿瘤,吸烟是引起肺癌的首要因素。肺癌的发生与细胞基因突变有关,从基因水平上研究细胞对卷烟烟气的反应及肿瘤形成过程是肿瘤研究的关键所在。运用人全基因组芯片技术检测吸烟致肺癌相关基因差异表达,通过RT-PCR验证基因芯片结果的真实性。采用抑制剂和激活剂调节基因的蛋白表达和活性,运用western-blot、酶活性检测、流式细胞术等检测TG2在卷烟烟气在支气管上皮细胞恶性转化过程中的的表达情况及对细胞凋亡、增殖、周期等的影响。结果发现吸烟致肺癌差异表达基因中,差异倍数在两倍以上的共124个,其中表达上调基因79个,表达下调基因45个。这些差异表达基因大致可分代谢、细胞凋亡、细胞周期、Notch信号通路、p53信号通路、过氧化物酶体增生物激活受体信号通路等共27个功能组。RT-PCR验证基因芯片结果发现,RT-PCR结果和基因芯片结果吻合率80%以上,说明基因芯片的结果比较真实可靠。对差异表达基因TG2在卷烟烟气致支气管上皮细胞恶性转化相关性研究中发现,TG2在恶性转化细胞中表达下调,单次染毒也能使TG2表达下调,TG2表达及活性改变对细胞凋亡、增殖、周期等产生影响。TG2可能通过调控细胞凋亡增殖、周期等影响卷烟烟气对支气管上皮细胞的恶性转化。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章文献综述  8-14
  1 吸烟与肺癌的关系  8
  2 转谷氨酰胺酶-2与人类肿瘤的关系  8-13
    2.1 TG2的结构  8-10
    2.2 TG2的生理功能  10-11
      2.2.1 TG2与信号传导  10
      2.2.2 TG2对细胞周期的影响  10-11
      2.2.3 TG2对细胞凋亡的影响  11
    2.3 TG2与肿瘤的相关性  11-13
      2.3.1 TG2与肿瘤发生的关系  11-12
      2.3.2 TG2与肿瘤转移的关系  12
      2.3.3 TG2与肿瘤治疗的关系  12-13
  3 本研究的总体设想  13-14
第二章吸烟致肺癌基因芯片研究  14-35
  1 前言  14
  2 材料与方法  14-18
    2.1 材料  14-15
    2.2 实验方法  15-18
  3 结果  18-34
    3.1 RNA质量鉴定结果  18-19
    3.2 芯片杂交结果  19-23
    3.3 差异基因筛选  23-27
    3.4 差异基因的生物信息学分析  27-32
    3.5 Real-Time qPCR验证基因芯片结果  32-34
  4 讨论与结论  34-35
第三章卷烟烟气总粒相物致支气管上皮细胞恶性转化过程中TG2的表达特征分析  35-44
  1 前言  35
  2 材料与方法  35-37
    2.1 材料  35-36
      2.1.1 主要试剂  35-36
      2.1.2 主要仪器  36
    2.2 实验方法  36-37
      2.2.1 卷烟烟气总粒相物(TPM)的制备  36
      2.2.2 细胞培养  36
      2.2.3 细胞存活率检测  36
      2.2.4 Western-blot分析  36
      2.2.5 TG2活性检测  36-37
      2.2.6 细胞凋亡试验  37
      2.2.7 细胞增殖试验  37
      2.2.8 细胞周期试验  37
  3 结果  37-43
    3.1 细胞存活实验结果  37-38
    3.2 Western-Blot结果  38-39
    3.3 TG2活性检测结果  39-40
    3.4 细胞凋亡试验结果  40-41
    3.5 细胞增殖试验结果  41-42
    3.6 细胞周期试验结果  42-43
  4 讨论与结论  43-44
论文总结  44-45
下一步研究计划  45-46
参考文献  46-50
英文缩略词  50-51
致谢  51-52
作者简历  52

吸烟致肺癌差异基因筛选及TG2功能研究

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