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白花蛇舌草抗肿瘤有效部位黄酮和多糖的纯化及其脂质体复合物的研究

作　者: 杨培民
导　师: 倪健
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中药制药学
关键词: 白花蛇舌草 脂质体复合物 黄酮苷元 酸水解 精制多糖 抗肿瘤活性 顶空-GC法 HPLC-MS法
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的对临床常用的抗肿瘤中药白花蛇舌草进行深入研究,分离纯化其抗肿瘤活性部位(多糖和黄酮),对白花蛇舌草黄酮苷进行体外转化,得到脱去糖链、分子量变小、极性降低、脂溶性和膜通透性高、可直接吸收入血的黄酮苷元,与多糖联合制备成适合抗肿瘤药物的最佳载体——脂质体复合物,提高药物的膜透过性和靶向性,增强疗效、降低毒副作用；对白花蛇舌草脂质体复合物进行初步稳定性考察及药效学实验研究。方法1.采用适宜的提取及纯化方法制得高纯度的白花蛇舌草多糖有效部位,对其理化性质及一级结构进行初步研究分析。2.以大孔吸附树脂法纯化白花蛇舌草黄酮苷,采用酸水解法对黄酮苷进行体外转化,制备白花蛇舌草黄酮苷元。3.采用顶空-GC法对白花蛇舌草黄酮苷元中的大孔树脂有机残留物进行检查。4.采用HPLC-MS法对白花蛇舌草黄酮苷元的基本母核、相对比例等进行初步分析。5.比较并优化不同的脂质体制备工艺,制备白花蛇舌草黄酮苷元脂质体。6.以白花蛇舌草多糖作为冻干赋形剂(保护剂),采用冷冻干燥技术制备具有良好稳定性的前体脂质体(白花蛇舌草脂质体复合物)。7.对白花蛇舌草脂质体复合物的理化性质及初步稳定性进行考察。8.分别采用体内、外抗肿瘤实验法等对白花蛇舌草脂质体复合物的药效学进行研究。结果1.采用水提分级醇沉法制得了白花蛇舌草粗多糖,然后分别以鞣酸沉淀法和活性炭吸附法去除蛋白质和色素等杂质,进而分别采用超滤技术、DEAE-32离子交换层析和Superdex 30凝胶层析等精制手段制得了高纯度精制多糖(PODⅡ)。2.通过乙醇回流法提取白花蛇舌草黄酮有效部位,分别采用改良石硫法、AB-8型大孔吸附树脂技术进行纯化精制,得高纯度白花蛇舌草黄酮苷；采用温和酸水解法将白花蛇舌草黄酮苷转化为分子量小、极性低、具有良好脂溶性和膜通透性的黄酮苷元。3.通过对白花蛇舌草黄酮苷元的顶空-GC法分析发现,本文所采用的大孔树脂预处理方法(专利技术)可有效去除AB-8型大孔树脂中的有机残留物,成品中的有机残留物检查均符合相关规定。4.通过对白花蛇舌草黄酮苷元的HPLC-MS法分析发现,其基本黄酮母核为槲皮素和山奈酚,二者相对含量约为3.2：1。5.对薄膜分散法和逆向蒸发法两种脂质体制备方法进行重点比较,以药物的包封率为主要评价指标,最终采用改进的逆向蒸发法制备了具有良好稳定性和较高包封率的白花蛇舌草黄酮苷元脂质体。6.以PODⅡ作为冻干赋形剂(保护剂),同时为药效成分,采用冷冻干燥技术制得了具有良好稳定性的白花蛇舌草脂质体复合物。7.分别对白花蛇舌草脂质体复合物的粒径分布、外观形态、粒径及粒度分布、pH值和Zeta电位等理化性质进行了检查；对光照、温度等影响脂质体稳定性的主要因素进行了考察；采用室温留样法考察了白花蛇舌草脂质体复合物的3个月初步稳定性。8.采用在体实验法分别试验了本研究脂质体复合物对S180和H22实体瘤的生长抑制以及腹水瘤的生命延长作用,对裸鼠移植人肺癌A549肿瘤生长的影响；采用体外实验法考察了对肿瘤细胞H460、Hela、Bel-7402和MCF-7生长的抑制作用；另外,分别考察了白花蛇舌草脂质体复合物对小鼠巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞增殖反应和脾NK细胞活性作用的影响,反映其对小鼠免疫功能的调节作用。结论制得的白花蛇舌草脂质体复合物表现了良好的免疫增强和抗肿瘤活性,且制剂稳定性良好,其中的多糖和黄酮成分配伍应用,共奏“扶正祛邪”之效,符合传统中医复方“多成分、多靶点、多途径”的作用特点,从而发挥“整体效应”。本课题研究成果具有较高的学术价值及开发应用前景,对于白花蛇舌草的合理用药、综合开发利用及其产业化发展具有重要意义。

全文目录


中文摘要  7-9
Abstract  9-11
缩略词表(List of Abbreviations)  11-12
前言  12-16
第一章 文献综述  16-37
  第一节 白花蛇舌草的研究概况  16-23
    1 研究概述  16
    2 化学成分  16-18
    3 药理作用  18-19
    4 临床应用  19-21
    5 相关制剂  21-22
    6 总结与讨论  22-23
  第二节 国内外脂质体的研究进展  23-30
    1 研究概述  23-24
    2 制备方法  24-25
    3 给药途径  25-26
    4 质量评价  26-27
    5 现代应用  27-29
    6 总结与讨论  29-30
  第三节 多糖及黄酮的纯化方法总结  30-34
    1 多糖的分离纯化  30
    2 黄酮的分离纯化  30-33
    3 总结与讨论  33-34
  第四节 黄酮苷类成分的肠道菌群代谢转化研究现状  34-37
    1 研究概述  34
    2 转化实例  34-36
    3 总结与讨论  36-37
第二章 白花蛇舌草总黄酮的提取纯化及理化性质研究  37-79
  第一节 白花蛇舌草总黄酮的提取工艺研究  37-49
    1 仪器与材料  37-38
    2 实验方法  38-39
    3 实验结果  39-48
    4 实验小结  48-49
  第二节 白花蛇舌草总黄酮的大孔树脂纯化工艺研究  49-58
    1 仪器与材料  49-50
    2 实验方法  50-51
    3 实验结果  51-57
    4 实验小结  57-58
  第三节 总黄酮精制品中大孔树脂的有机残留物检查  58-66
    1 仪器与材料  58-59
    2 实验方法  59-61
    3 实验结果  61-65
    4 实验小结  65-66
  第四节 白花蛇舌草总黄酮的酸水解及其产物的理化性质研究  66-79
    1 仪器与材料  66-67
    2 实验方法  67
    3 实验结果  67-78
    4 实验小结  78-79
第三章 白花蛇舌草多糖的提取纯化及结构分析研究  79-117
  第一节 白花蛇舌草多糖的提取工艺研究  79-99
    1 仪器与材料  79-80
    2 实验方法  80-81
    3 实验结果  81-96
    4 实验小结  96-99
  第二节 白花蛇舌草多糖的纯化工艺研究  99-109
    1 仪器与材料  99-100
    2 实验方法  100-102
    3 实验结果  102-107
    4 实验小结  107-109
  第三节 白花蛇舌草精制多糖的结构分析研究  109-117
    1 仪器与材料  109-110
    2 实验方法  110-111
    3 实验结果  111-115
    4 实验小结  115-117
第四章 白花蛇舌草脂质体的制备工艺研究  117-135
  第一节 分析方法的建立  117-125
    1 仪器与材料  118-119
    2 实验方法  119-121
    3 实验结果  121-124
    4 实验小结  124-125
  第二节 制备工艺的研究  125-135
    1 仪器与材料  125
    2 实验方法  125-127
    3 实验结果  127-134
    4 实验小结  134-135
第五章 白花蛇舌草体脂质体复合物的冻干工艺研究  135-145
  1 仪器与材料  135
  2 实验方法  135-139
  3 实验结果  139-144
  4 实验小结  144-145
第六章 白花蛇舌草脂质体复合物的理化性质及稳定性研究  145-151
  1 仪器与材料  145
  2 实验方法  145-146
  3 实验结果  146-150
  4 实验小结  150-151
第七章 白花蛇舌草脂质体复合物的初步药效学实验研究  151-167
  第一节 体内对实体肿瘤生长的影响  151-157
    1 仪器与材料  151-152
    2 实验方法  152-154
    3 实验结果  154-156
    4 实验小结  156-157
  第二节 体外对肿瘤细胞生长的影响  157-163
    1 仪器与材料  157
    2 实验方法  157-159
    3 实验结果  159-162
    4 实验小结  162-163
  第三节 对小鼠免疫功能调节的影响  163-167
    1 仪器与材料  163
    2 实验方法  163-165
    3 实验结果  165-166
    4 实验小结  166-167
全文总结  167-172
附图  172-179
参考文献  179-187
致谢  187-188
个人简历  188

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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