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抑癌基因SARI在慢性髓细胞白血病中异常调控分子机制及作用的研究

作　者: 黄庆
导　师: 黄士昂
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 慢性髓细胞白血病 SARI基因 BCR-ABL K562细胞 siRNA
分类号: R733.7
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的SARI基因是近年来发现的一种新型抑癌基因,它在多种正常组织细胞中均有表达,而在许多实体肿瘤中表达水平明显下降。然而其表达异常机制尚不清楚。本课题通过检测慢性髓细胞白血病患者与正常人中SARI基因中的表达水平,以慢性髓细胞白血病细胞系K562为模型,探讨SARI基因在慢性髓细胞白血病中的作用及其表达调节可能的分子机制,为慢性髓细胞白血病基因治疗的研究提供新线索。方法(1)初发慢性髓细胞白血病患者中SARI表达水平的研究：46名初发慢性髓细胞白血病患者作为实验组,40名健康受试者作为正常对照组。采集每位患者和健康受试者的外周血,分离单个核细胞,使用实时定量PCR技术检测两组人群中SARI基因的相对表达水平。(2) SARI基因在慢性髓细胞白血病中表达异常分子机制的研究：以慢性髓细胞白血病细胞系K562为研究模型,使用Bcr-Abl抑制剂STI571处理K562细胞,做时间梯度实验和浓度梯度实验。设置浓度梯度：0,0.5,1.5,2.5μM及时间梯度：6,12,24小时。收集各组细胞,用实时定量PCR技术检测各组SARI基因表达情况。使用P13K抑制剂LY294002 (20μM), MEK抑制剂PD98059 (50μM), JAK抑制剂Ag490(501μM)处理K562细胞24小时后收集各组细胞,以未处理K562细胞作为对照组,用实时定量PCR技术检测各组SARI基因表达情况。(3)SARI基因在慢性髓细胞白血病中作用的研究：使用SARI特异性siRNA转染K562细胞：siRNA+转染液+K562细胞为实验组,转染液+K562细胞为Mock对照组,未转染K562细胞为空白对照组。使用750ng SARI特异性siRNA转染K562细胞72小时,用实时定量PCR技术检测K562细胞中SARI基因表达水平,确定其干扰效率。用STI571(2.5μM)分别处理实验组和Mock对照组K562细胞24小时,用流式细胞术检测两组K562细胞凋亡率及STI571处理后两组K562细胞的凋亡率。结果1.初发慢性髓细胞白血病患者中SARI表达水平的研究与正常对照组(n=40)相比,实验组(n=46) SARI基因表达在mRNA水平明显降低,三次实验结果所得数据经过Student’s unpaired t-test分析,p<0.001,两组间具有明显的统计学差异。2. SARI基因在慢性髓细胞白血病中表达异常分子机制的研究2.1 STI571对SARI基因表达的影响使用STI571(1.5μM)处理K562细胞12小时后SARI基因mRNA表达水平开始增高。在浓度梯度实验中,各组SARI基因表达未显示明显的浓度依赖关系；在时间梯度实验中,各组SARI基因表达显示较明显的时间依赖性,随着处理时间的延长,SARI基因表达逐渐升高。2.2信号通路抑制剂对SARI基因表达的影响用MEK抑制剂PD98059处理24小时后,K562细胞中SARI基因1mRNA表达水平高于对照组(p<0.05)；与之相似,用JAK抑制剂Ag490处理24小时后,K562细胞中SARI基因mRNA表达水平高于对照组(p<0.05)；而PI3K抑制剂处理24小时后,K562细胞中SARI基因mRNA表达水平下降。3. SARI基因在慢性髓细胞白血病中作用的研究3.1 SARI特异性siRNA干扰效应与Mock对照组相比,使用SARI特异性siRNA(750ng)转染K562细胞72小时后,SARI基因mRNA表达水平降低了72%(p<0.001)；而空白对照组和Mock对照组SARI基因mRNA表达水平无明显差异(p>0.05)。3.2 SARI干扰对K562细胞凋亡的影响使用流式细胞术检测各组凋亡率,与Mock对照组相比,实验组K562细胞凋亡率增加了(1.74±0.30)%,p=0.05)。3.3 SARI干扰对STI571诱导细胞凋亡的影响实验组与Mock对照组经过STI571(2.5μM)处理24小时后,使用流式细胞术检测两组凋亡率,与Mock对照组相比,实验组K562细胞凋亡率减少了((7.61±0.16)%,p<0.001)。结论慢性髓细胞白血病患者外周血SARI mRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联。在慢性髓细胞白血病细胞系K562中,SARI基因表达下调与Bcr-Abl抑制作用有关,而Bcr-Abl下调SARI基因表达可能是通过其下游MEK和JAK信号通路实现的。干扰SARI基因在K562细胞中表达部分降低了STI571诱导的凋亡作用,SARI基因可能参与了STI571诱导细胞凋亡作用。

全文目录


英文缩略词表  6-8
摘要  8-11
Abstract  11-14
前言  14-19
  参考文献  16-19
第一部分 初发慢性髓细胞白血病患者SARI表达水平的研究  19-31
  材料与方法  20-24
  结果  24-26
  讨论  26-27
  参考文献  27-31
第二部分 SARI基因在慢性髓细胞白血病中表达异常的分子机制研究  31-44
  材料与方法  32-35
  结果  35-37
  讨论  37-40
  参考文献  40-44
第三部分 SARI基因在慢性髓细胞白血病中作用的研究  44-59
  材料与方法  45-48
  结果  48-52
  讨论  52-54
  参考文献  54-59
综述  59-83
  参考文献  70-83
附录  83-84
致谢  84

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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