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白树花多糖的结构及其抗凝血活性研究

作　者: 杨曦明
导　师: 张丽萍
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 白树花多糖 结构分析 白树花多糖硫酸酯 抗凝血活性
分类号: S567.39
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


白树花[Polyporus albicans （Imaz.） Teng]主要分布于中国吉林省,属于担子菌纲多孔菌科多孔菌属,是一种可食用和药用的真菌。目前对白树花多糖的研究报道较少,只有国内对其结构和免疫活性进行了初步研究。但是白树花多糖的精确结构研究以及对多糖进行硫酸化修饰后的抗凝血活性研究未见报道。因此本研究将白树花真菌多糖进一步分离纯化,对其结构、硫酸化修饰及修饰后多糖的抗凝血活性进行研究,以期为白树花多糖的进一步开发利用提供理论基础。白树花粗多糖经冻融、醇分级、蛋白酶法和Sevage法脱蛋白、HPLC分离后得到一个主要的纯化组份-PATPⅠ。经HPLC分析表明:白树花多糖PATPⅠ由葡萄糖、甘露糖、半乳糖组成,其摩尔比为15.7:4.2:1,分子量为33 kDa。采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化、GC-MS、IR、NMR等方法对PATPⅠ进行测定分析,确定其分子结构为:主链由（1→2）-β-D-Man残基、以及少量的（1→3）α-Glc构成,分支点为（1→2, 6）-β-Glc残基;支链丰富,平均每2个己糖残基就会出现一个分支。推断PATPⅠ结构的重复单元为:采用氯磺酸-吡啶法对白树花多糖进行了硫酸化修饰,结果显示:多糖硫酸化修饰后红外光谱（IR）出现1250cm-1的S=O特征吸收峰;Sepharose CL-6B柱层析结果表明硫酸化修饰后多糖样品的洗脱峰峰位前移,即硫酸基的引入使多糖的分子量明显增大,多糖中的部分羟基被硫酸酯基团所取代。离子色谱法分析测得硫酸基占14.7%,取代度为Ds=1.41。体外抗凝血研究结果表明,白树花多糖硫酸酯具有良好的抗凝血效果;其抗凝血功能主要通过抑制内源凝血系统的凝血因子发挥作用,与肝素的抗凝血机理基本一致,即通过与抗凝血酶Ⅲ（ATⅢ）结合,进一步抑制凝血因子Ⅱa和Ⅹa而发挥抗凝血作用;动物体内抗凝血实验结果与体外实验结果是一致的,而且在使用12小时内未发现对动物血液、肝肾功能有不良影响。肝素在防止血栓形成及治疗方面在临床上广泛使用,但是存在较多的副作用,因此寻找肝素的替代品一直是备受关注的研究课题。本研究结果显示白树花多糖硫酸酯抗凝血效果及初步的安全评价均比较良好,具有替代肝素成为新的抗凝药的潜力,值得进一步深入研究。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-12
中英文对照及英文缩写词表  12-13
第一章 引言  13-40
  1.1 多糖的分离纯化  13-16
    1.1.1 预处理  13-14
    1.1.2 多糖的提取  14
    1.1.3 除蛋白  14-15
    1.1.4 除色素  15
    1.1.5 多糖的含量测定  15-16
    1.1.6 多糖的分离纯化  16
    1.1.7 多糖的纯度鉴定  16
  1.2 多糖的结构分析  16-17
  1.3 多糖的分子修饰  17-20
    1.3.1 多糖分子的硫酸化修饰  18
    1.3.2 多糖分子的磷酸化修饰  18
    1.3.3 多糖分子的乙酰化修饰  18-19
    1.3.4 多糖分子的烷基化修饰  19
    1.3.5 多糖分子的磺酰化修饰  19
    1.3.6 多糖分子的羧甲基化修饰  19-20
  1.4 多糖的生物活性  20-25
    1.4.1 抗病毒活性  20-21
    1.4.2 抗凝血活性  21
    1.4.3 增强机体免疫功能，调节免疫活性  21-23
    1.4.4 抗肿瘤活性  23-24
    1.4.5 降血糖活性  24
    1.4.6 抗衰老活性  24
    1.4.7 降血脂活性  24
    1.4.8 其他活性  24-25
  1.5 真菌多糖的研究进展  25-27
    1.5.1 真菌多糖的结构  25
    1.5.2 真菌多糖的提取、分离和纯化  25-26
    1.5.3 真菌多糖的结构与生物活性的关系  26-27
    1.5.4 真菌多糖研究展望  27
  1.6 多糖硫酸酯及其抗凝血活性研究进展  27-31
    1.6.1 多糖的硫酸化  28-29
    1.6.2 多糖硫酸酯的抗凝血活性  29-31
  1.7 白树花多糖研究现状  31-32
  1.8 选题依据和意义  32-33
  参考文献  33-40
第二章 白树花多糖PATPI 的制备与理化性质研究  40-51
  2.1 实验材料、试剂与仪器  40-41
    2.1.1 材料  40
    2.1.2 试剂  40
    2.1.3 仪器设备  40-41
  2.2 实验方法  41-44
    2.2.1 白树花多糖的精制  41
    2.2.2 白树花多糖的纯化  41
    2.2.3 Sepharose CL-6B 凝胶柱层析分析  41
    2.2.4 高效液相色谱法分离制备多糖  41
    2.2.5 白树花多糖总糖含量分析  41-42
    2.2.6 糖醛酸含量的测定  42
    2.2.7 蛋白质含量的测定  42-43
    2.2.8 单糖组成测定  43
    2.2.9 白树花多糖的分子量分析及纯度鉴定  43-44
  2.3 结果与讨论  44-49
    2.3.1 白树花多糖（PATP）的制备  44
    2.3.2 白树花多糖（PATP）的理化性质分析  44-47
    2.3.3 HPLC 法制备白树花多糖PATPⅠ  47
    2.3.4 白树花多糖（PATPⅠ）的理化性质分析  47-49
  2.4 本章小结  49-50
  参考文献  50-51
第三章 白树花多糖(PTPⅠ)的结构测定  51-72
  3.1 实验材料、试剂与仪器  51-52
    3.1.1 实验材料  51
    3.1.2 试剂  51
    3.1.3 仪器设备  51-52
  3.2 实验方法  52-54
    3.2.1 红外光谱分析  52
    3.2.2 碘反应实验  52
    3.2.3 部分酸水解  52
    3.2.4 高碘酸氧化和Smith 降解  52
    3.2.5 甲基化分析  52-54
    3.2.613 C NMR 分析  54
  3.3 结果与讨论  54-70
    3.3.1 白树花多糖（PATPⅠ）的比旋光度测定  54
    3.3.2 白树花多糖（PATPⅠ）碘反应检测  54
    3.3.3 白树花多糖（PATPⅠ）的红外光谱分析（IR）  54-55
    3.3.4 部分酸水解结果分析  55-57
    3.3.5 高碘酸氧化和Smith 降解结果分析  57-62
    3.3.6 甲基化分析  62-69
    3.3.713 C NMR 分析结果  69-70
  3.4 本章小结  70-71
  参考文献  71-72
第四章 白树花多糖硫酸酯的制备及其抗凝血活性的研究  72-92
  4.1 引言  72
  4.2 材料、试剂与仪器  72-73
    4.2.1 实验材料  72
    4.2.2 试剂  72-73
    4.2.3 仪器  73
  4.3 实验方法  73-75
    4.3.1 白树花多糖硫酸酯的制备  73
    4.3.2 硫酸基含量测定  73
    4.3.3 抗凝血机理研究  73-75
    4.3.4 统计学方法  75
  4.4 结果与讨论  75-85
    4.4.1 白树花多糖硫酸酯制备  75-76
    4.4.2 抗凝血机理  76-85
  4.5 讨论  85-89
    4.5.1 白树花多糖硫酸酯的制备  85-86
    4.5.2 抗凝血机理研究  86-89
  4.6 本章小结  89-90
  参考文献  90-92
第五章 白树花多糖硫酸酯体内抗凝血活性研究  92-100
  5.1 背景  92
  5.2 材料、试剂与仪器  92-93
    5.2.1 材料  92
    5.2.2 试剂  92
    5.2.3 仪器  92-93
  5.3 实验方法  93
    5.3.1 白树花多糖硫酸酯（PATS）抗凝血的量效关系  93
    5.3.2 白树花多糖硫酸酯抗凝血的时效关系  93
    5.3.3 凝血指标的测试方法  93
    5.3.4 健康指标测定方法  93
    5.3.5 统计学方法  93
  5.4 实验结果  93-95
    5.4.1 白树花多糖硫酸酯抗凝血量效关系  93-94
    5.4.2 白树花多糖硫酸酯抗凝血时效性  94
    5.4.3 白树花多糖硫酸酯对全血细胞的影响  94-95
    5.4.4 白树花多糖硫酸酯对生化指标的影响  95
  5.5 讨论  95-97
    5.5.1 抗凝血量效关系  96
    5.5.2 抗凝血时效性  96
    5.5.3 安全性测定  96-97
  5.6 本章小结  97-98
  参考文献  98-100
论文总结  100-102
攻读博士学位期间发表的论文  102-103
致谢  103

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 菌类 > 其他
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